近日，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）正式發(fā)布了《熱原與內(nèi)毒素檢測：問答》指南（第二版）。該指南匯集了FDA對藥品、生物制品及醫(yī)療器械企業(yè)在熱原和內(nèi)毒素檢測方面的最新思考，為行業(yè)提供了重要的合規(guī)指引。
自1977年FDA首次接受鱟試劑（LAL）檢測替代兔熱原試驗以來，內(nèi)毒素檢測方法不斷演進。本次發(fā)布的第二版指南取代了2012年第一版，同時FDA已正式撤回1987年版指南，因為原有內(nèi)容已不能反映當(dāng)前監(jiān)管思路。
新指南與USP相關(guān)章節(jié)以及AAMI ST72:2002/R2010標(biāo)準(zhǔn)相呼應(yīng)，為行業(yè)提供了更為全面的檢測建議和接受標(biāo)準(zhǔn)。
13個關(guān)鍵問題詳解：
1. 如何建立過程控制和成品放行的取樣方案？取樣應(yīng)基于科學(xué)合理的原則，考慮原材料、中間產(chǎn)品和成品的潛在污染風(fēng)險。企業(yè)需考慮生產(chǎn)工藝設(shè)計、中間體存放時間、內(nèi)毒素去除步驟和成品內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)等因素。取樣策略應(yīng)是動態(tài)的，隨著對工藝控制信心的增強而調(diào)整。
2. 何時適合進行復(fù)測？復(fù)測應(yīng)有明確的科學(xué)依據(jù)。如果出現(xiàn)超出標(biāo)準(zhǔn)（OOS）結(jié)果，應(yīng)遵循OOS調(diào)查程序，不能簡單通過復(fù)測來推翻初始結(jié)果。只有確定了初始結(jié)果無效的原因后，復(fù)測結(jié)果才能用于產(chǎn)品放行決策。
3. 樣品儲存和處理是否重要？非常重要！不當(dāng)?shù)膬Υ婧吞幚砜赡軐?dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。USP章節(jié)明確指出，樣品儲存容器不得釋放或吸附內(nèi)毒素，儲存條件應(yīng)確保樣品穩(wěn)定性。
4. 成品能否混合成混合樣檢測？如果藥典中沒有針對該產(chǎn)品的特殊規(guī)定，且混合后的樣品檢測靈敏度（即調(diào)整后的最大有效稀釋倍數(shù)）不低于1:2，企業(yè)可考慮將最多10個成品容器（如生產(chǎn)批次的開始、中間和結(jié)束階段的樣品）混合后進行檢測。對于醫(yī)療器械，可按照ISO 10993系列標(biāo)準(zhǔn)進行混合提取檢測。
5. 能否使用藥典以外的替代方法？可以。如果替代方法在準(zhǔn)確性、靈敏度、精密度、選擇性或自動化適應(yīng)性方面具有優(yōu)勢，且按照USP相關(guān)章節(jié)完成驗證，證明能達到相當(dāng)或更優(yōu)的結(jié)果，即可使用。
6. 如何在不同內(nèi)毒素檢測方法間轉(zhuǎn)換？通過比較兩種方法的檢測限和抑制/增強特性來驗證等效性。對藥品和生物制品，轉(zhuǎn)換方法需提交預(yù)先批準(zhǔn)補充申請。對III類醫(yī)療器械，可按30天通知程序提交變更。
7. 1987版指南中的內(nèi)毒素限值表為何取消了？由于藥物劑量和規(guī)格不斷增加，原有表格已過時。正確的限值確定方法是使用USP或AAMI標(biāo)準(zhǔn)中提供的計算公式。即使是各論中規(guī)定的限值，也應(yīng)根據(jù)現(xiàn)行產(chǎn)品規(guī)格和劑量方案進行驗證。
8. 質(zhì)量源于設(shè)計（QbD）理念如何用于內(nèi)毒素限值設(shè)定？基于對產(chǎn)品和工藝的理解，結(jié)合風(fēng)險管理，確保最終產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。定量檢測優(yōu)于限度檢測，有助于趨勢分析和及時識別偏差。
9. 何時適合使用兔熱原試驗？對于某些生物制品，21 CFR 610.13(b)明確要求兔熱原試驗。當(dāng)風(fēng)險評估顯示可能存在非內(nèi)毒素?zé)嵩?，或由于產(chǎn)品特性無法通過稀釋消除檢測干擾時，也應(yīng)考慮使用兔熱原試驗。
10. 針對多種動物的獸藥產(chǎn)品如何確定限值？基于最小動物種類的最大產(chǎn)品劑量計算。如果標(biāo)簽顯示可用于幼年和成年動物，以幼年動物為最差情況。需要使用體重計算劑量時，應(yīng)采用該物種的平均體重。
11. 醫(yī)療器械的內(nèi)毒素限值是多少？根據(jù)器械與人體接觸部位不同而異：» 接觸心血管和淋巴系統(tǒng)：0.5 EU/mL或20 EU/器械» 接觸腦脊液：0.06 EU/mL或2.15 EU/器械» 接觸眼內(nèi)環(huán)境：可能適用更嚴(yán)格限值，需咨詢相關(guān)部門
12. FDA對治療性藥品的常規(guī)篩查有何期望？理想情況下應(yīng)篩查未稀釋產(chǎn)品。如存在干擾，應(yīng)確定能消除干擾的最低產(chǎn)品稀釋度，并以此作為常規(guī)篩查起點。例如，若產(chǎn)品MVD為1:100，在1:10有抑制但1:20無抑制，可選擇1:30作為篩查稀釋度。
13. 控制標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素是否仍可用于檢測？可以?？刂茦?biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（CSEs）是相對于國際或國家標(biāo)準(zhǔn)品而言的二級或三級標(biāo)準(zhǔn)品，通常由試劑生產(chǎn)商針對特定批號試劑進行標(biāo)定。FDA鼓勵使用經(jīng)過適當(dāng)標(biāo)定的CSEs，這有助于節(jié)約成本并保護一級標(biāo)準(zhǔn)品的庫存。
結(jié)語
本次FDA發(fā)布的第二版指南體現(xiàn)了監(jiān)管機構(gòu)對內(nèi)毒素檢測科學(xué)性的持續(xù)關(guān)注。企業(yè)應(yīng)認(rèn)真學(xué)習(xí)指南內(nèi)容，結(jié)合自身產(chǎn)品特點，建立科學(xué)合理的檢測策略，確保產(chǎn)品質(zhì)量和患者安全。
值得注意的是，指南強調(diào)："本指南不確立任何法律強制責(zé)任，但描述了FDA在當(dāng)前議題上的思考"。企業(yè)可采取替代方法，但需滿足相關(guān)法規(guī)要求，并與FDA進行充分溝通。
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