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摘 要： 建立高效液相色譜法測定化妝品中功效成分補骨脂酚以及禁用成分補骨脂素和異補骨脂素?；瘖y品樣品經(jīng)甲醇超聲提取20 min后，采用Waters XSelect CSH C18色譜柱分離，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，流量為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，進樣體積為10 μL，采用二極管陣列檢測器檢測，以外標法定量。補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素的質(zhì)量濃度在各自范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9，檢出限為0.4～0.8 mg/kg，定量限為2～3 mg/kg，在液態(tài)水基類、乳液類、膏霜類3種不同基質(zhì)中，樣品的加標平均回收率為96.2%～105%，測定結(jié)果的相對標準偏差為0.40%～3.8％（n=6）。該方法樣品處理簡便、結(jié)果準確可靠，適用于化妝品中補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素的測定。

 

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜法； 化妝品； 補骨脂酚； 補骨脂素； 異補骨脂素

 

補骨脂酚屬于異戊二烯酚萜類化合物，是豆科植物補骨脂的干燥成熟果實主要成分之一，化學結(jié)構(gòu)式如圖1所示[1]。研究表明，補骨脂酚具有良好的抗衰老[2?4]、抗氧化[5?6]、美白[7]、抗炎[8]等生物活性，可清除自由基、抑制炎癥因子的細胞表達、降低氧化應激、減少黑色素生成和促進多種膠原蛋白表達，是一種極具潛力的化妝品活性成分[9?11]。

圖1   補骨脂酚結(jié)構(gòu)式

Fig. 1   Structure of bakuchiol

補骨脂酚作為化妝品原料在海外廣受追捧，該原料最早于2022年8月在國家藥品監(jiān)督管理局備案。截至目前，國內(nèi)共有4家企業(yè)完成該原料備案。作為化妝品新原料監(jiān)測期內(nèi)產(chǎn)品，補骨脂酚在國內(nèi)化妝品中的應用研究呈現(xiàn)持續(xù)增長態(tài)勢。補骨脂酚主要從補骨脂的干燥成熟果實提取獲得，除雜不完全可能存在補骨脂素和異補骨脂素殘留，此兩種組分屬于呋喃香豆素，具有光敏作用，可使受射處皮膚紅腫、色素增加[12]。呋喃香豆素類化合物已被《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》 (2015年版)列為禁用物質(zhì)。為評價含補骨脂酚化妝品的成分標識真實性和安全性，亟需建立化妝品中補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素同時測定的方法。目前，補骨脂酚的檢測方法主要為高效液相色譜法[13?15]，用于補骨脂藥材及其制劑中的質(zhì)量控制，局限于藥品領(lǐng)域。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》 (2015年版)收載高效液相色譜法測定補骨脂素和異補骨脂素[13]，該方法僅為定性方法。筆者建立高效液相色譜法測定液態(tài)水基類、乳液類和膏霜類化妝品中功效成分補骨脂酚，同時檢查是否存在禁用組分補骨脂素和異補骨脂素殘留。通過優(yōu)化流動相、檢測波長等液相色譜條件和樣品處理方法，實現(xiàn)了3種化合物的同時測定。該方法操作簡便、專屬性強、準確高效，為化妝品中補骨脂酚的質(zhì)量安全控制提供更為科學、有效的技術(shù)手段。

 

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：SHIMADZU LC-20AT型，配二極管陣列檢測器，日本島津公司。電子天平：XPR105型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。超聲波清洗器：KQ-250DE型，昆山市超聲儀器有限公司。渦旋儀：MX-S型，北京大龍興創(chuàng)實驗儀器股份公司。補骨脂酚對照品：質(zhì)量分數(shù)為99.28%，批號為10309-37-2，斯坦福分析化學公司。補骨脂素、異補骨脂素對照品：質(zhì)量分數(shù)分別為99.7%、99.8%，批號分別為110739-202319、110738-202317，中國食品藥品檢定研究院化妝品樣品：共收集10批標識含補骨脂酚樣品，包括液體水基、乳液和膏霜基質(zhì)，均為市售。甲醇、乙腈：均為色譜純，德國默克公司。磷酸、冰乙酸：均為優(yōu)級純，國藥集團化學試劑有限公司。實驗用水為超純水，由Milli-Q型超純水儀制備。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters XSelect CSH C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美國沃特世公司)；柱溫：30 ℃；檢測波長：261 nm (補骨脂酚)，246 nm (補骨脂素、異補骨脂素)；進樣體積：10 μL；流動相：A相為水，B相為乙腈；流量：1.0 mL/min；洗脫方式：梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1。

表1   梯度洗脫程序

Tab. 1   Gradient elution program

 

1.3 溶液配制

補骨脂酚標準儲備液：10.194 mg/mL。精密稱取補骨脂酚對照品51.34 mg，置于5 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至標線，混勻，于4 ℃避光保存。補骨脂素標準儲備液：0.943 2 mg/mL。精密稱取補骨脂酚對照品9.46 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至標線，混勻，于4 ℃避光保存。異補骨脂素標準儲備液：1.043 9 mg/mL。精密稱取異補骨脂素對照品10.46 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至標線，混勻，于4 ℃避光保存?；旌蠘藴蕛淙芤海壕芰咳「鳂藴蕛湟哼m量，用甲醇溶解并稀釋制成補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素質(zhì)量濃度分別為40.78、3.77、4.18 μg/mL的混合標準儲備溶液。系列混合標準工作溶液：取混合標準儲備液，加甲醇逐級稀釋，制成補骨脂酚質(zhì)量濃度分別為1.02、5.10、10.19、20.39、101.94、203.89 μg/mL，補骨脂素質(zhì)量濃度分別為0.094、0.47、0.94、4.72、9.43、18.86 μg/mL，異補骨脂素質(zhì)量濃度分別為0.10、0.52、1.04、5.22、10.44、20.88 μg/mL的系列混合標準工作溶液。

1.4 樣品處理

稱取約0.2 g化妝品樣品(精確至0.000 1 g)，置于10 mL具塞比色管中，加入8 mL甲醇，渦旋1 min，超聲(250 W，40 kHz)處理20 min后，冷卻至室溫，加入甲醇定容至10 mL，以5 000 r/min離心10 min，上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，取續(xù)濾液作為樣品溶液。如樣品中目標化合物濃度超過線性范圍上限，可用甲醇進一步稀釋后進樣。同法制備空白溶液。

1.5 樣品測定

分別取混合標準儲備溶液和樣品溶液，在1.2色譜條件下進樣分析，采集數(shù)據(jù)，利用各標準品的保留時間和DAD圖譜相似度進行定性，以外標法定量。

 

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長選擇

采用二極管陣列檢測器對補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素的混合標準溶液在190～400 nm波長范圍進行全波長掃描，紫外吸收光譜如圖2所示。從圖2中可以看出，補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素分別在261、246和247 nm波長處有吸收峰，故以261 nm作為補骨脂酚的檢測波長，以246 nm作為補骨脂素和異補骨脂素的檢測波長。

圖2   補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素的紫外吸收光譜圖

Fig. 2   The UV absorption spectrum of bakuchiol，psoralen and isopsoralen

2.2 流動相選擇

比較了不同流動相體系[乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%(體積分數(shù)，下同)磷酸溶液、乙腈-0.1%冰乙酸溶液]對補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素的色譜行為影響，不同流動相體系下3種化合物色譜分離參數(shù)見表2。由表2可知，加入0.1%磷酸或冰乙酸后，目標化合物的峰形、理論板數(shù)和分離度變化不顯著，補骨脂素和異補骨脂素在各流動相體系下均能完全分離。甲醇-水體系洗脫能力較乙腈-水體系弱，3種化合物出峰時間相對較晚。采用甲醇為流動相時補骨脂素和異補骨脂素理論板數(shù)較高，補骨脂酚柱效相對較低。綜合考慮出峰時間、分離度和柱效，最終采用乙腈和水為流動相。

表2   不同流動相體系下3種化合物色譜分離參數(shù)

Tab. 2   Chromatographic separation parameters of three compounds under different mobile phase systems

 

2.3 色譜柱選擇

分別考察了不同廠家不同品牌C18色譜柱對3個目標化合物分離效果、柱效和峰形的影響，色譜柱包括COSMOSIL 5-C18-MS-II 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Waters XSelect CSH C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Agilent ZORBAX SB-C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)和Waters XBridge C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。結(jié)果表明，補骨脂素和異補骨酯素在4種色譜柱上均能獲得完全分離，各化合物理論板數(shù)均大于20 000，色譜峰形較好，其中Waters XSelect CSH C18 色譜柱的分離效果最佳，因此選擇Waters XSelect CSH C18色譜柱為分析柱。

2.4 提取方法的選擇

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)中收載的補骨脂素和異補骨脂素測定方法采用甲醇超聲提取[13]。3種化合物均可溶于甲醇、乙醇等有機溶劑，分別考察了甲醇、乙腈、乙醇和不同體積分數(shù)（60%和80%）甲醇溶液作為提取溶劑對目標化合物提取效率的影響。以膏霜類化妝品為代表樣品，通過在空白基質(zhì)中加入適量標準儲備液，制成補骨脂酚、補骨脂素、異補骨脂素質(zhì)量分數(shù)分別為2 039、188、209 mg/kg的加標樣品，按照1.3方法配制加標樣品溶液。膏霜基質(zhì)中3種化合物不同提取溶劑的回收率如圖3所示。從圖3中可以看出，補骨脂酚的回收率明顯下降，且以體積分數(shù)為60%甲醇溶液提取后樣品溶液較為渾濁，樣品過濾較為困難，其余提取溶劑對3種化合物的提取效率相差不大。綜合考慮，最后選擇甲醇作為樣品處理的提取溶劑。

圖3   膏霜基質(zhì)中3種化合物不同提取溶劑下的回收率

Fig. 3   The recovery rate of three compounds in cream matrix under different extraction methods

2.5 專屬性試驗

分別取混合標準儲備溶液、空白溶液和加標樣品溶液，在1.2色譜條件下測定，色譜圖如圖4所示。從圖4中可以看出，各色譜峰峰形良好，且樣品溶液基質(zhì)無干擾，滿足測定要求，表明方法專屬性良好。

圖4   混合標準儲備溶液、空白樣品溶液、加標樣品溶液色譜圖

Fig. 4   Chromatographic diagram of mixed standard stock solution，blank sample solution and spiked sample solution

1—補骨脂素；2—異補骨脂素；3—補骨脂酚

2.6 線性方程、檢出限和定量限

取系列混合標準工作溶液，在1.2色譜條件下測定，以目標化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(x)，以色譜峰面積為縱坐標(y)，繪制標準工作曲線，計算線性方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明，補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素在質(zhì)量濃度分別在1.02～203.89 μg/mL、0.094～18.86 μg/mL和0.10～20.88 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9。取空白基質(zhì)樣品0.2 g，加入適量混合標準儲備溶液，然后按樣品處理方法進行操作，測定信噪比，以信噪比為3時對應的質(zhì)量分數(shù)計算方法檢出限，以信噪比為10時對應的質(zhì)量分數(shù)計算方法定量限，根據(jù)樣品質(zhì)量和定容體積換算成樣品中的含量。3種目標物質(zhì)量濃度的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表3。

表3   3種目標物質(zhì)量濃度的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

Tab. 3   The linear range， linear equation， correlation coefficient， detection limit and quantitative limit of the mass concentration of the three target substances

 

2.7 樣品加標回收和精密度試驗

取液態(tài)水基類、乳液類和膏霜類空白基質(zhì)各0.2 g，分別加補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素對照品儲備液適量，制備低、中、高3個濃度水平的加標樣品，每個水平制備6份樣品，按照1.3配制加標樣品溶液，在1.2色譜條件下進樣測定，計算加標回收率和相對標準偏差，結(jié)果見表4。由表4可知，補骨脂酚的平均回收率為99.1%～105%，補骨脂素的平均回收率為96.2%～103%，異補骨脂素的平均回收率為97.5%～104%，相對標準偏差(RSD)均不大于3.8%，表明該方法具有良好的準確度和精密度，滿足分析方法要求。

表4   樣品加標回收與精密度試驗結(jié)果(n=6)

Tab. 4   Results of samples spiked recovery and precision test(n=6)

 

2.8 穩(wěn)定性試驗

取膏霜基質(zhì)中濃度加標樣品溶液，分別于第0、4、8、12、18、24 h，在1.2色譜條件下進樣測定，穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表5。由表5可知，24 h內(nèi)補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素的峰面積的RSD分別為0.20%、1.3%、0.80%，表明各化合物在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表5   穩(wěn)定性試驗結(jié)果

Tab. 5   Results of stability test

 

3 結(jié)論

(1) 建立了高效液相色譜-二極管陣列檢測器同時測定水基類、乳液類和膏霜類三種不同基質(zhì)類型化妝品中功效成分補骨脂酚、禁用組分補骨脂素和異補骨脂素的定性定量方法。(2)對《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)補骨脂素等4種組分的定性方法的色譜條件和處理方法進行優(yōu)化，經(jīng)過方法學驗證，結(jié)果準確可靠。(3)目前，關(guān)于化妝品中補骨脂酚原料的報道較少，其在市場應用不斷擴大，該方法能夠為規(guī)范化妝品市場補骨脂酚原料及含該功效成分產(chǎn)品的質(zhì)量和安全提供有力技術(shù)手段。《宇航計測技術(shù)》簡介《宇航計測技術(shù)》創(chuàng)刊于 1981 年，是由中國航天科技集團有限公司主管，北京航天計量測試技術(shù)研究所與北京無線電計量測試研究所聯(lián)合主辦的計量技術(shù)性刊物，國內(nèi)外公開發(fā)行，雙月刊?！队詈接嫓y技術(shù)》曾榮獲全國、北京市和航天系統(tǒng)優(yōu)秀科技期刊獎，為中國科技核心期刊、中國核心期刊（遴選）數(shù)據(jù)庫收錄期刊、中國科技論文統(tǒng)計源期刊，中國科學引文數(shù)據(jù)庫來源期刊、中國學術(shù)期刊綜合評價數(shù)據(jù)庫來源期刊，是中國期刊方陣“雙效”期刊。中國標準刊號為 ISSN1000－7202/CN11－2052/V，全國各地郵局均可訂閱，郵發(fā)代號：18-123。廣告經(jīng)營許可證：京豐工商廣字第 0013 號。

 

參考文獻

1 KRISHNA A，EDACHERY B，ATHALATHIL S. Bakuchiol—a natural meroterpenoid：Structure，isolation，synthesis and function-alization approaches［J］. Royal Society of Chemistry，2022，12（14）： 8 815.

2 DHALIWAL S，RYBAK I，ELLIS S R，et al. Prospective，randomized，double-blind assessment of topical bakuchiol and retinol for facial photoageing［J］. British Association of Dermatologists，2019，180（2）： 289.

3 DRAELOS Z D，GUNT H，ZEICHNER J，et al. Clinical evaluation of a nature-based bakuchiol anti-aging moisturizer for sensitive skin［J］. Journal of Drugs in Dermatology，2020，19（12）： 1 181.

4 BLUEMKE A，RING A P，IMMEYER J，et al. Multidirectional activity of bakuchiol against cellular mechanisms of facial ageing-experimental evidence for a holistic treatment approach［J］. International Journal of Cosmetic Science，2022，44（3）： 377.

5 KIM K A，SHIM S H，AHN H R，et al. Protective effects of the compounds isolated from the seed of Psoralea corylifolia on oxidative stress-induced retinal damage［J］. Toxicology and Applied Pharmacology，2013，269（2）： 109.

6 DEIRDRE H，RUTH T，SOFIA I，et al. Antioxidant skincare treatment for hyperpigmented and photodamaged skin：multi-center，open-label，cross-seasonal case study［J］. Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology，2023，16（10）： 31.

7 CARIOLA A，CHAMI M E，GRANATIERI J，et al. Anti-tyrosinase and antioxidant activity of meroterpene bakuchiol from Psoralea corylifolia（L.）［J］. Food Chemistry，2023，405： 134 953.

8 MA Q Q，BIAN M，GONG G H，et al. Synthesis and evaluation of bakuchiol derivatives as potent anti-inflammatory agents in vitro and in vivo［J］. Journal of Natural Products，2022，85（1）： 15.

9 FANNING J E，MCGEE S A，IBRAHIM O I. Human clinical trials using topical bakuchiol formulations for the treatment of skin disorders：a systematic review［J］. Journal of Drugs in Dermatology，2024，23（4）： 239.

10 GREENZAID J，ADAM F，POOJA S. The use of bakuchiol in dermatology：A review of in vitro and in vivo evidence［J］. Journal of Drugs in Dermatology，2022，21（6）： 624.

11 PUYANA C，CHANDAN N，TSOUKAS M. Applications of bakuchiol in dermatology：Systematic review of the literature［J］. Journal of Cosmetic Dermatology，2022，21（12）： 6 636.

12 梅家齊，楊得坡.呋喃香豆素光化學毒性及其脫敏柑橘精油的研制［J］.香料香精化妝品，2010（5）： 55.
    MEI Jiaqi，YANG Depo. Phototoxicity of furanocoumarins and preparation of furanocoumarin free citrus oil［J］. Flavour Fragrance Cosmetics，2010（5）： 55.

13 張志宇，周海玲，馬麟.高效液相色譜法測定補骨脂中補骨脂酚的含量［J］.臨床醫(yī)學工程，2013，20（5）： 539.
    ZHANG Zhiyu，ZHOU Hailing，MA Lin. Determination of bakuchiol in fruits of Psoralea carylifolia by high-performance liquid chromatography［J］. Clinical Medical Engineering，2013，20（5）： 539.

14 黃曉婧，周曉英，文永盛. HPLC法同時測定補骨脂藥材中補骨脂二氫黃酮和補骨脂酚的含量［J］.中國藥房，2017，28（24）： 3 400.
    HUANG Xiaojing，ZHOU Xiaoying，WEN Yongsheng. Simultaneous determination of bavachin and bakuchiol in Psorslea corylifolia by HPLC［J］. China Pharmacy，2017，28（24）： 3 400.

15 李建梅，周凡，西爾艾力·吐爾遜，等.反相高效液相色譜法在補骨脂提取物3種主要成分含量測定中的應用［J］.中國醫(yī)藥導報，2017，14（27）： 12.
    LI Jianmei，ZHOU Fan，Tursun Xirali，et al. Application of RP-HPLC in determination of the three main kinds of components in the extract of Psoralea corylifolia［J］. China Medical Herald，2017，14（27）： 12.