中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

摘要

耳用制劑作為經(jīng)耳部給藥的重要局部給藥制劑，在耳部能夠獲得比全身給藥更高的局部藥物濃度，在治療感染性、炎癥性及耳部結(jié)構(gòu)異常相關(guān)疾病中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)，耳用制劑發(fā)展較快，關(guān)于耳用制劑的非臨床安全性評(píng)價(jià)也備受關(guān)注，然而因耳部特殊的解剖特點(diǎn)及耳用制劑的特性，對(duì)其安全性評(píng)價(jià)體系雖有大體框架，但未形成標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，一定程度上制約了耳用制劑的研發(fā)。本文對(duì)耳用制劑非臨床安全性評(píng)價(jià)關(guān)鍵考慮點(diǎn)進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研及案例分析，旨在促進(jìn)耳用制劑非臨床安全性評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化。

關(guān)鍵詞

耳用制劑；安全性評(píng)價(jià)；影響因素

耳用制劑是通過(guò)直接作用于耳部（外耳、中耳或內(nèi)耳）的特殊給藥途徑來(lái)發(fā)揮局部治療作用的制劑。對(duì)于耳部相關(guān)適應(yīng)證（如急性/慢性外耳部炎、真菌性外耳部炎、中耳炎、梅尼埃病等），耳用制劑能夠通過(guò)直接作用于患病部位（局部高暴露）發(fā)揮其治療作用和優(yōu)勢(shì)。耳用制劑的局部作用特性在提升療效的同時(shí)，也因局部高暴露及耳部特殊且復(fù)雜的解剖構(gòu)造帶來(lái)獨(dú)特的安全性風(fēng)險(xiǎn)，為經(jīng)耳部給藥的非臨床安全性評(píng)價(jià)帶來(lái)相當(dāng)大的挑戰(zhàn)。當(dāng)前耳用制劑非臨床安全性評(píng)價(jià)遵循國(guó)內(nèi)外指導(dǎo)原則，已形成基于動(dòng)物模型（如兔耳刺激性試驗(yàn)、豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)、豚鼠聽(tīng)力試驗(yàn)等）的標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)價(jià)體系，但該體系仍存在顯著不足，如動(dòng)物模型與人類(lèi)耳道生理差異導(dǎo)致數(shù)據(jù)外推誤差，藥物耳毒性的評(píng)估方法標(biāo)準(zhǔn)化參數(shù)缺乏，各國(guó)監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)的差異阻礙國(guó)際互認(rèn)，以及針對(duì)特殊人群（如兒童、老年人）的個(gè)性化評(píng)價(jià)體系尚未建立。亟須通過(guò)技術(shù)創(chuàng)新與標(biāo)準(zhǔn)協(xié)同，構(gòu)建更精準(zhǔn)、更高效的安全性評(píng)價(jià)范式，為耳用制劑的研發(fā)與轉(zhuǎn)化提供科學(xué)支撐。

1 耳用制劑安全性評(píng)價(jià)的一般考慮

耳用制劑的安全性評(píng)價(jià)需要根據(jù)其開(kāi)發(fā)目的進(jìn)行評(píng)價(jià)內(nèi)容的選擇，對(duì)于1類(lèi)創(chuàng)新藥，需要進(jìn)行兩個(gè)種屬的一般毒性試驗(yàn)（嚙齒類(lèi)一般為大鼠或豚鼠、非嚙齒類(lèi)一般為比格犬或非人靈長(zhǎng)類(lèi)），安全性藥理試驗(yàn)（中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)），特殊安全性試驗(yàn)（耳毒性試驗(yàn)、局部刺激性試驗(yàn)和過(guò)敏性試驗(yàn)，刺激性試驗(yàn)可伴隨在重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中考察），特殊毒性試驗(yàn)（遺傳毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)和致癌性試驗(yàn)）。對(duì)于2類(lèi)改良型新藥，應(yīng)根據(jù)其原有劑型及給藥途徑的特點(diǎn)進(jìn)行相應(yīng)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）發(fā)布的“改變劑型和改變給藥途徑藥品非臨床安全性評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則”建議在證明新藥與原研藥在活性成分、適應(yīng)證、藥理作用、暴露水平等方面具有可比性的情況下，可引用已上市藥品的安全性數(shù)據(jù)，否則應(yīng)開(kāi)展對(duì)應(yīng)的毒性研究試驗(yàn)。針對(duì)改良部分則需進(jìn)行補(bǔ)充研究，若對(duì)輔料數(shù)據(jù)存疑可在安全性研究中設(shè)置對(duì)照組，新增經(jīng)耳部給藥途徑則需增加局部毒性評(píng)價(jià)（包括皮膚刺激性試驗(yàn)及過(guò)敏性試驗(yàn)），如環(huán)丙沙星/地塞米松改劑型增加了豚鼠的過(guò)敏性試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行鼓室給藥用以評(píng)估其耳毒性。

2 耳用制劑安全性評(píng)價(jià)的影響因素

2.1 受試物

掌握受試物完整且全面的信息對(duì)安全性評(píng)價(jià)至關(guān)重要，基本信息應(yīng)包括處方組成、來(lái)源、批號(hào)、儲(chǔ)存條件、有效期、配制方法、溶解度、黏度和pH值等。耳用制劑可按劑型分為耳用液體制劑（滴耳劑、洗耳劑、噴霧劑、泡沫劑等），耳用半固體制劑（軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、耳塞等），耳用固體制劑（耳用散劑、耳用丸劑等）。對(duì)于不同類(lèi)型的耳部制劑應(yīng)關(guān)注其重點(diǎn)信息。

2.1.1 處方組成

耳用制劑的處方組成包括活性藥物成分與輔料，輔料又可分為溶劑/分散介質(zhì)、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑、增稠/助懸劑與其他用途添加劑，輔料的使用對(duì)耳用制劑的黏度或張力、pH值、溶解度、抗菌性能和穩(wěn)定性等具有不同的效用，但也會(huì)帶來(lái)一定的安全性風(fēng)險(xiǎn)。比如環(huán)糊精類(lèi)輔料常用于藥物的增溶與穩(wěn)定性提升，但不同類(lèi)型的環(huán)糊精耳毒性大小具有較大差異。大鼠單次皮下注射3000、4000mg/kg的羥丙基-β-環(huán)糊精能引發(fā)顯著的耳毒性，毒性表現(xiàn)主要包括外毛細(xì)胞和內(nèi)毛細(xì)胞的丟失，破壞耳蝸基底的神經(jīng)纖維和螺旋神經(jīng)節(jié)，也可引起小鼠聽(tīng)力閾值升高。Lichtenhan等研究發(fā)現(xiàn)豚鼠耳蝸直接注射2%或4%的羥丙基-β-環(huán)糊精均能誘導(dǎo)聽(tīng)力閾值增加。不同類(lèi)型環(huán)糊精的耳毒性大小順序?yàn)榱u丙基-β-環(huán)糊精>羥丙基γ環(huán)糊精>磺丁基醚γ環(huán)糊精=磺丁基醚β環(huán)糊精=羥丙基α環(huán)糊精。為控制微生物數(shù)量、保證藥品質(zhì)量，耳用制劑常添加防腐劑，常用的防腐劑有苯扎氯銨、芐索氯銨、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、硫柳汞和對(duì)氯間二甲苯酚等。防腐劑對(duì)耳部局部組織的毒性是防腐劑類(lèi)輔料安全性評(píng)價(jià)的關(guān)鍵，重點(diǎn)考慮防腐劑引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)及其對(duì)中耳和內(nèi)耳組織的影響。Barlow等分別將0.026%和0.05%的苯扎氯銨滴入幼年豚鼠鼓室，持續(xù)7d，在第14日檢查毛細(xì)胞、鼓膜和相鄰的中耳黏膜，發(fā)現(xiàn)0.026%和0.05%的苯扎氯銨對(duì)耳蝸毛細(xì)胞無(wú)明顯影響，但會(huì)引起黏膜及鼓膜的輕、中度增厚和炎癥。不同種類(lèi)輔料用法用量信息可參考FDA非活性成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)。輔料用法用量超出FDA批準(zhǔn)用于耳部制劑的輔料用法用量范圍，或使用了范圍之外的特殊輔料，則應(yīng)單獨(dú)考察輔料的安全性，設(shè)置重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)輔料對(duì)照組[2-3，17]。

2.1.2 滲透壓

耳用制劑的滲透壓會(huì)影響藥物安全性評(píng)價(jià)。常規(guī)耳用制劑滲透壓應(yīng)接近人體耳道黏膜生理滲透壓（280~310mOsm·kg-1），避免高滲或低滲引起皮膚黏膜刺激性疼痛或細(xì)胞損傷。在外耳道及鼓膜完整情況下，作用于外耳道的耳用制劑在有限范圍內(nèi)的滲透壓變化可以被接受。若鼓膜出現(xiàn)穿孔等損傷，非等滲制劑進(jìn)入中耳后可能干擾中耳及內(nèi)耳的生理功能進(jìn)而影響耳毒性的評(píng)價(jià)。除了直接的毒性影響外，滲透壓也可影響藥物在耳部的吸收和分布，使耳部組織中局部藥物濃度分布不均，間接影響藥物的有效性，增加毒性風(fēng)險(xiǎn)。高滲溶液可通過(guò)損傷黏膜增加藥物吸收率，導(dǎo)致全身毒性被高估；低滲溶液可導(dǎo)致黏膜水腫進(jìn)而降低藥物滲透，需結(jié)合藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)修正毒性結(jié)果。耳用制劑的不同給藥途徑及用法決定其滲透壓要求，若超出范圍，建議提供局部毒性與全身毒性的補(bǔ)充數(shù)據(jù)。

2.1.3 黏度

耳用制劑的黏度影響對(duì)耳用制劑局部毒性及系統(tǒng)毒性的評(píng)價(jià)。制劑黏度影響藥物的滯留時(shí)間及吸收分布，高黏度制劑可延長(zhǎng)藥物在局部的滯留時(shí)間，增加局部藥物濃度，如環(huán)丙沙星泡沫劑在治療急性外耳炎方面相比于溶液劑更有效，但同時(shí)制劑黏度過(guò)度增加可能引發(fā)局部刺激或損傷。同時(shí)高黏度制劑影響藥物透過(guò)鼓膜或耳道，影響藥物吸收速率，導(dǎo)致全身暴露量降低，從而在安全性評(píng)價(jià)中低估系統(tǒng)毒性。引入起黏度調(diào)節(jié)作用的增稠劑可能導(dǎo)致過(guò)敏概率的增加。安全性評(píng)價(jià)研究中耳用制劑黏度應(yīng)與臨床擬用配方一致，非臨床研究需涵蓋黏度極端值。

2.1.4 pH值

耳用制劑的pH值會(huì)影響耳毒性的評(píng)估。局部外用耳用制劑為抑制細(xì)菌生長(zhǎng)通常為酸性，酸性過(guò)強(qiáng)（pH<3.0）的制劑長(zhǎng)期使用可導(dǎo)致耳道黏膜上皮細(xì)胞損傷，表現(xiàn)為紅斑、水腫甚至潰瘍（家兔耳道刺激性試驗(yàn)中常見(jiàn)此類(lèi)反應(yīng)），用于中耳及內(nèi)耳的酸性制劑會(huì)影響聽(tīng)力檢測(cè)。Suzuki等研究發(fā)現(xiàn)，pH為4.5左右的復(fù)方硫酸鋁溶液直接滴在圓窗膜上會(huì)引起聽(tīng)性腦干反應(yīng)（ABR）檢測(cè)20kHz閾值的永久性偏移，Yamano等研究發(fā)現(xiàn)乙酸的pH值為5.0或更低時(shí)，對(duì)豚鼠第八神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位有顯著的毒性作用，暴露時(shí)間越長(zhǎng)毒性作用越強(qiáng)。堿性過(guò)大（pH>8.0）的制劑長(zhǎng)期使用會(huì)影響耳道正常弱酸性環(huán)境（pH5.0~6.5），可能引發(fā)耳道表皮屏障功能異常，增加藥物滲透性，加劇局部炎癥。少數(shù)短期使用的特殊用途滴耳劑pH值呈現(xiàn)弱堿性，如用于耳部耵聹栓塞軟化的院內(nèi)制劑，大部分耳道給藥滴耳劑的pH值分布在酸性至中性范圍。Eng等調(diào)查研究表明，英國(guó)臨床常用的15款滴耳劑的pH值分布在2.89~7.83，主要集中于酸性到中性pH值范圍。超出常規(guī)pH值范圍的耳用制劑建議結(jié)合使用途徑及擬用于臨床的使用期限提供局部耐受性數(shù)據(jù)。

2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

耳用制劑的非臨床安全性評(píng)價(jià)對(duì)動(dòng)物種屬的選擇要綜合考慮藥物的作用靶點(diǎn)、作用機(jī)制、適應(yīng)證特點(diǎn)及動(dòng)物生理解剖結(jié)構(gòu)差異，根據(jù)試驗(yàn)研究類(lèi)型不同涉及的動(dòng)物種屬包括斑馬魚(yú)，嚙齒類(lèi)動(dòng)物（豚鼠、大鼠、小鼠、栗鼠和沙鼠），非嚙齒類(lèi)動(dòng)物（兔、犬、豬、恒河猴和羊）。對(duì)于重復(fù)給藥試驗(yàn)，因豚鼠中耳結(jié)構(gòu)與人類(lèi)相似（如鼓膜厚度、聽(tīng)小骨排列），耳蝸大小適合病理操作用于評(píng)估藥物滲透至中耳的安全性。對(duì)于過(guò)敏性試驗(yàn)，豚鼠對(duì)過(guò)敏因素有較強(qiáng)反應(yīng)性，適合評(píng)估藥物過(guò)敏反應(yīng)。但也因豚鼠外耳道較短存在藥物暴露時(shí)間較短的問(wèn)題。對(duì)于皮膚刺激性試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)兔因其皮膚與人類(lèi)類(lèi)似，體型適中易于操作及成本低等原因，是皮膚刺激試驗(yàn)運(yùn)用最廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。耳毒性評(píng)價(jià)通常選用聽(tīng)力敏感的動(dòng)物種屬，包括豚鼠、SD大鼠、栗鼠、沙鼠和恒河猴，其中豚鼠聽(tīng)力特征與人類(lèi)相似，鼓膜面積及聽(tīng)泡結(jié)構(gòu)相對(duì)較大，在獲取中耳分泌物、黏膜切片及耳蝸等時(shí)也較其他種類(lèi)動(dòng)物更為方便，綜合其易繁殖、低成本及背景數(shù)據(jù)較多的優(yōu)點(diǎn)，是聽(tīng)力學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。諸多耳用制劑新藥申報(bào)選用豚鼠作為耳毒性研究相關(guān)動(dòng)物，如FDA批準(zhǔn)的兩種復(fù)方滴耳藥，即環(huán)丙沙星/地塞米松滴耳混懸滴劑及環(huán)丙沙星和氟氫松滴耳液，均選用豚鼠用于耳毒性的研究。

2.2.2 給藥途徑

不同的給藥途徑會(huì)對(duì)耳部局部組織產(chǎn)生不同程度的刺激，進(jìn)而影響非臨床安全性評(píng)估的側(cè)重點(diǎn)。當(dāng)前耳用制劑常規(guī)的給藥方式如經(jīng)外耳道給藥，包括直接滴注、噴霧、耳浴等，根據(jù)耳用制劑的理化特性，外耳道給藥需重點(diǎn)考察耳毒性、局部刺激性及對(duì)耳膜的完整性影響。其他的特殊給藥途徑如經(jīng)中耳鼓室給藥，包括植管、置入藥液海綿法、經(jīng)鼓膜注射、微導(dǎo)管置管、西爾弗斯坦微芯等，因藥物直接作用于中耳及內(nèi)耳附近，在考察局部刺激性的同時(shí)需重點(diǎn)關(guān)注對(duì)中耳及內(nèi)耳的影響。內(nèi)耳直接給藥，包括內(nèi)耳開(kāi)窗注射、修飾人工耳蝸電極給藥、微流體注射給藥等，藥物可能會(huì)通過(guò)內(nèi)耳血管及淋巴液進(jìn)入全身血液循環(huán)，在關(guān)注耳毒性的同時(shí)需考察全身系統(tǒng)毒性。同時(shí)，經(jīng)中耳及內(nèi)耳的給藥絕大部分屬于侵入式的藥械組合給藥方式，對(duì)藥物的劑量和技術(shù)要求嚴(yán)格，操作不當(dāng)會(huì)對(duì)中耳及內(nèi)耳的精細(xì)結(jié)構(gòu)造成損傷，需結(jié)合其給藥操作帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)綜合評(píng)價(jià)其安全性。

2.2.3 給藥頻率

給藥頻率影響局部組織耐受性及系統(tǒng)毒性暴露水平的評(píng)估。高頻次的給藥操作可能導(dǎo)致耳道黏膜刺激（充血、紅腫或潰瘍），同時(shí)增加藥物經(jīng)耳道吸收后的全身暴露水平；而較低的給藥頻率可能無(wú)法達(dá)到有效的治療濃度，影響安全性評(píng)估效果。急性毒性試驗(yàn)可模擬臨床超量使用劑量，采用單次或24h內(nèi)多次給藥，重點(diǎn)考察黏膜損傷及全身反應(yīng)。重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)應(yīng)選擇與臨床頻率一致的給藥方案，同時(shí)開(kāi)展毒代動(dòng)力學(xué)研究，收集血藥濃度-時(shí)間曲線下面積、峰濃度等動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以確定給藥頻率對(duì)系統(tǒng)暴露水平的影響。

2.2.4 試驗(yàn)期限

耳用制劑試驗(yàn)期限的選定可以參考相關(guān)指導(dǎo)原則根據(jù)擬訂的臨床療程、適應(yīng)證、用藥人群等進(jìn)行設(shè)計(jì)。耳用制劑給藥的恢復(fù)期設(shè)置主要是為了評(píng)估藥物毒性作用的可逆性，觀察停藥后局部（耳道黏膜、鼓膜）及全身毒性反應(yīng)的恢復(fù)情況，識(shí)別延遲性毒性（如致敏性反應(yīng)）或不可逆損傷（如聽(tīng)力損傷及神經(jīng)毒性），需在單次給藥試驗(yàn)、重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)及局部刺激試驗(yàn)中設(shè)置恢復(fù)期。恢復(fù)期的時(shí)長(zhǎng)需根據(jù)選擇的動(dòng)物種屬、給藥途徑、試驗(yàn)類(lèi)型進(jìn)行調(diào)整。單次給藥毒性試驗(yàn)及局部刺激試驗(yàn)恢復(fù)期通常在7~21d，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)恢復(fù)期通常在28d及以上。

2.2.5 給藥劑量設(shè)置

遵循經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織、FDA及國(guó)家藥品監(jiān)督管理局等發(fā)布的指導(dǎo)原則[2-3，40-41]，對(duì)耳部制劑的非臨床評(píng)價(jià)通常需要設(shè)置三個(gè)劑量組以及一個(gè)溶媒（或輔料）對(duì)照組，必要時(shí)可以增加空白對(duì)照組和/或陽(yáng)性對(duì)照組，起始劑量設(shè)置可以基于未觀察到有害作用劑量（NOAEL）的1/10或觀察到有害作用的最小劑量（LOAEL），覆蓋臨床預(yù)期暴露量的1倍、3倍、10倍，同時(shí)監(jiān)測(cè)局部組織病理學(xué)和血漿藥物濃度。耳部制劑的給藥途徑較為特殊，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耳道容積和耳部解剖構(gòu)造限制了給藥體積，是劑量設(shè)置的核心限制因素。過(guò)量給藥可能導(dǎo)致藥物外溢或局部刺激，從而增加全身吸收風(fēng)險(xiǎn)。因此需要提供較高濃度的受試物，在較低的給藥體積下達(dá)到覆蓋預(yù)期臨床暴露倍數(shù)的劑量。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 耳毒性檢查

耳用制劑的非臨床安全性評(píng)價(jià)除需檢測(cè)毒理學(xué)常規(guī)指標(biāo)外，還應(yīng)著重關(guān)注耳毒性。耳毒性是指由于暴露于某些藥物、化學(xué)物質(zhì)和/或電離輻射，導(dǎo)致內(nèi)耳受損，特別是影響耳蝸和前庭結(jié)構(gòu)及感覺(jué)功能。非臨床安全性評(píng)價(jià)需考察藥物在內(nèi)耳局部及全身系統(tǒng)暴露量，提供外耳、中耳、內(nèi)耳及周?chē)X組織病理學(xué)及聽(tīng)力數(shù)據(jù)，以支持藥物局部與全身暴露下的耳毒性、安全性結(jié)論。其中聽(tīng)力數(shù)據(jù)的檢測(cè)，需進(jìn)行ABR檢查，也可增加畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射檢查（DPOAE）。對(duì)于動(dòng)物聽(tīng)力的檢查，因藥物累及耳蝸不同部位導(dǎo)致動(dòng)物對(duì)不同頻率聲源的敏感性變化，需考慮ABR的刺激聲頻率。ABR檢查實(shí)驗(yàn)中豚鼠、昆明系小鼠、CBA小鼠、BALB/c小鼠、C57BL小鼠等5種嚙齒動(dòng)物的聽(tīng)覺(jué)最適頻率為8~24kHz，超出最適范圍進(jìn)行ABR檢查可能會(huì)由于ABR閾值較高而產(chǎn)生較大的誤差，豚鼠ABR檢查的各個(gè)頻率ABR閾值較其余4種動(dòng)物低，在ABR閾值檢測(cè)中更具優(yōu)勢(shì)。FDA批準(zhǔn)的環(huán)丙沙星/地塞米松滴耳混懸滴劑耳毒性研究，每組選取10只豚鼠，雌雄各半，進(jìn)行ABR閾值測(cè)定，刺激聲源頻率為2、8及16kHz，結(jié)果顯示環(huán)丙沙星/地塞米松滴耳混懸滴劑組與對(duì)照組間無(wú)顯著性差異。綜合各類(lèi)研究及文獻(xiàn)材料報(bào)道，ABR閾值測(cè)定刺激聲源常用頻率包括短聲（click）和純音（2、4、8、16、20kHz或更高頻率），刺激聲源頻率囊括低、中、高頻段，根據(jù)受試物自身特點(diǎn)及類(lèi)似物的相關(guān)耳毒性研究綜合考慮ABR刺激聲源頻率的選擇。

2.3.2 刺激性試驗(yàn)

耳用制劑刺激性評(píng)價(jià)是對(duì)用于耳部的藥物制劑在局部使用時(shí)可能產(chǎn)生的刺激作用進(jìn)行評(píng)估的過(guò)程。這種評(píng)價(jià)通常包括對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如實(shí)驗(yàn)兔、豚鼠等）進(jìn)行耳部給藥，通過(guò)形態(tài)學(xué)及病理檢查耳部組織（如外耳道、中耳等）在給藥后是否有充血、水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、組織損傷等情況，或通過(guò)檢測(cè)相關(guān)炎癥因子的表達(dá)水平的變化來(lái)綜合判斷耳用制劑的局部刺激性。此外也會(huì)考慮制劑的酸堿度、滲透壓、藥物濃度等因素對(duì)局部刺激的影響，以預(yù)測(cè)制劑在臨床應(yīng)用中的刺激性。

2.3.3 過(guò)敏性試驗(yàn)

過(guò)敏性試驗(yàn)是觀察動(dòng)物接觸受試物后的全身或局部過(guò)敏反應(yīng)，通常選用豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，結(jié)合受試物的特點(diǎn)參照經(jīng)皮給藥過(guò)敏性試驗(yàn)方法進(jìn)行，采用主動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)、主動(dòng)全身過(guò)敏試驗(yàn)或被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)，通過(guò)觀察臨床癥狀，檢測(cè)免疫球蛋白（Ig）（如IgE、IgG）、細(xì)胞因子（如組胺、白三烯）等指標(biāo)含量的變化，結(jié)合組織病理學(xué)檢查結(jié)果，如炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、組織損傷等過(guò)敏相關(guān)的病理改變綜合判斷耳用制劑是否具有過(guò)敏性，同時(shí)分析過(guò)敏反應(yīng)的劑量-反應(yīng)關(guān)系，以及與制劑成分、濃度、給藥方式等因素的相關(guān)性。

2.3.4 病理檢查

耳用制劑的安全性評(píng)價(jià)與常規(guī)給藥途徑相比有諸多不同，耳部的安全性是重點(diǎn)考察對(duì)象，通常需要對(duì)耳部進(jìn)行更細(xì)致的考察。需對(duì)外耳道、鼓膜、鼓室、耳蝸（毛細(xì)胞、血管紋及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞）、前庭系統(tǒng)進(jìn)行病理檢查，其中對(duì)于耳蝸的考察需要關(guān)注毛細(xì)胞的損傷狀況，通過(guò)耳蝸基底膜鋪片輔助特殊染色檢查毛細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量及分布，和/或檢查血管紋的形態(tài)，檢查螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量，如硝酸銀染色可結(jié)合毛細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)形成黑色沉淀用于形態(tài)學(xué)觀察，熒光染色可使用熒光素標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色毛細(xì)胞骨架蛋白（如圖1所示），免疫熒光染色可使用特異性抗體標(biāo)記標(biāo)志性蛋白如Myosin7a、Prestin等。對(duì)于前庭系統(tǒng)的評(píng)估則需要檢查壺腹嵴、橢圓囊斑及前庭神經(jīng)節(jié)。

3 耳用制劑安全性評(píng)價(jià)的結(jié)果分析

耳用制劑的安全性評(píng)估需綜合考量三個(gè)核心維度：安全范圍、種屬差異和臨床相關(guān)性、風(fēng)險(xiǎn)獲益情況。具體而言，若藥物在有效劑量與毒性劑量間存在足夠大的安全區(qū)間，或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的毒性機(jī)制與人類(lèi)生理無(wú)關(guān)（如嚙齒類(lèi)特有代謝途徑引發(fā)的毒性），或藥物針對(duì)嚴(yán)重耳部疾病（如耐藥性中耳炎、耳部腫瘤）時(shí)臨床療效顯著且風(fēng)險(xiǎn)可控，則即使出現(xiàn)毒性反應(yīng)仍可能被接受。

①安全范圍：評(píng)估耳用制劑給藥時(shí)，脫離給藥劑量談毒性反應(yīng)并不可取，當(dāng)毒性劑量遠(yuǎn)大于臨床用量時(shí)，實(shí)際臨床應(yīng)用中出現(xiàn)安全性風(fēng)險(xiǎn)的概率極小。②種屬差異和臨床相關(guān)性：耳用制劑的毒理學(xué)結(jié)果到臨床的外推受到耳部解剖結(jié)構(gòu)和生理的種屬差異影響，應(yīng)對(duì)其臨床相關(guān)性進(jìn)行仔細(xì)甄別，由于人和嚙齒動(dòng)物存在解剖差異，如豚鼠的圓窗位置和圓窗膜厚度與人不同影響藥物的吸收分布，將動(dòng)物研究結(jié)果轉(zhuǎn)化到臨床時(shí)須謹(jǐn)慎，不應(yīng)過(guò)度解讀和評(píng)估。③風(fēng)險(xiǎn)獲益情況：短期或急救用藥需更多地考慮風(fēng)險(xiǎn)獲益，且不能一味地從毒性反應(yīng)出發(fā)來(lái)否定藥物的安全性和進(jìn)一步的成藥性，例如硫酸新霉素具有明確的耳毒性，但在一些輕度局部感染（常見(jiàn)眼部、皮膚）且其他抗菌藥物治療無(wú)效的情況下，使用硫酸新霉素能迅速控制感染，避免感染擴(kuò)散引發(fā)更嚴(yán)重的并發(fā)癥，此時(shí)其療效受益較高。

4 總結(jié)與展望

耳用制劑是一類(lèi)經(jīng)耳部局部給藥，劑型種類(lèi)繁多的制劑總稱(chēng)，其在耳部能夠獲得比全身給藥更高的局部藥物濃度，因此較其他給藥方式的制劑具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。耳用制劑非臨床研究?jī)?nèi)容的選擇應(yīng)考慮研發(fā)目的和制劑的理化性質(zhì)，同時(shí)試驗(yàn)設(shè)計(jì)需綜合考慮動(dòng)物種屬選擇、給藥途徑、給藥頻率及檢測(cè)指標(biāo)等對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。因耳部結(jié)構(gòu)復(fù)雜，現(xiàn)有技術(shù)難以實(shí)現(xiàn)給藥后藥物分布、代謝及毛細(xì)胞損傷的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。例如，耳蝸毛細(xì)胞的凋亡過(guò)程具有時(shí)間依賴(lài)性，但傳統(tǒng)組織病理學(xué)僅能提供靜態(tài)終點(diǎn)數(shù)據(jù)，缺乏實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的毒性反饋。同時(shí)，嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如豚鼠、大鼠）與人類(lèi)內(nèi)耳解剖結(jié)構(gòu)和藥物代謝差異顯著，缺乏標(biāo)準(zhǔn)化跨物種毒性評(píng)價(jià)體系，導(dǎo)致數(shù)據(jù)臨床轉(zhuǎn)化困難。此外，現(xiàn)有評(píng)價(jià)方法評(píng)估耳毒性的技術(shù)操作較為復(fù)雜，缺乏簡(jiǎn)潔、快速、靈敏的生物標(biāo)志物。上述問(wèn)題阻礙了耳用制劑非臨床安全性評(píng)價(jià)研究的發(fā)展及耳用制劑新藥研發(fā)。在當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)價(jià)體系框架初步建立，但評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚無(wú)相應(yīng)針對(duì)性的指導(dǎo)性原則作為支持的情況下，本文根據(jù)文獻(xiàn)資料、指導(dǎo)原則、現(xiàn)有耳用制劑申報(bào)資料及自身研究經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行了關(guān)鍵點(diǎn)的總結(jié)，以期為耳用制劑非臨床研究的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化提供參考，但囿于公開(kāi)資料有限，案例僅能聚焦于常見(jiàn)的抗菌、激素類(lèi)耳用制劑，無(wú)法完整囊括新型生物制劑、納米靶向制劑等新興耳用制劑的非臨床安全性評(píng)價(jià)。