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摘 要： 建立16批不同產(chǎn)地五指毛桃的高效液相色譜指紋圖譜，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，對(duì)不同產(chǎn)地的五指毛桃質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。樣品經(jīng)CAPCELL PAK C18 MGⅢ色譜柱分離，以甲醇-0.4%（體積分?jǐn)?shù)）磷酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流量為0.5 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣體積為10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。采用相似度、聚類分析（HCA）、主成分分析（PCA）對(duì)16批不同產(chǎn)地的五指毛桃質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素4種成分的質(zhì)量濃度分別在各自范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不小于0.999 8，檢出限為0.03～0.05 μg/mL。建立了16批不同產(chǎn)地五指毛桃指紋圖譜，共標(biāo)定9個(gè)共有峰，并成功確認(rèn)4個(gè)特征峰。樣品各共有特征峰相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1.7%（n=6），樣品加標(biāo)平均回收率為87.0%～95.6%。4批樣品相似度均大于0.900，11批樣品相似度為0.702～0.896，1批樣品相似度為0.525；HCA將16批五指毛桃分為3類；PCA提取出3個(gè)主成分，有效反映了不同產(chǎn)地五指毛桃樣品共有成分的關(guān)聯(lián)特征。該方法分離效果好、重現(xiàn)性良好，可以為控制與評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地的五指毛桃的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

 

關(guān)鍵詞： 五指毛桃； 高效液相色譜法； 指紋圖譜； 聚類分析； 主成分分析

 

五指毛桃為?？浦参锎秩~榕的干燥根，別名“五爪龍”、“南芪”，是我國(guó)嶺南地區(qū)特色藥食同源中藥材[1]。該藥材主要分布于我國(guó)廣東、廣西兩省區(qū)及東南亞地區(qū)，多生長(zhǎng)于氣候濕潤(rùn)的山谷密林[2]。五指毛桃富含香豆素類(如補(bǔ)骨脂素、佛手柑內(nèi)酯)、黃酮類(含芹菜素、木犀草素等21種化合物)、氨基酸、揮發(fā)油等8類活性成分[3?7]。其具有健脾補(bǔ)肺、行氣利濕、舒筋活絡(luò)的功效，現(xiàn)代藥理研究表明，它還具有保肝、抗菌、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)等顯著藥理活性[8?12]。

 

當(dāng)前，廣東、廣西及湖南的地方藥材標(biāo)準(zhǔn)主要采用性狀鑒別、薄層色譜(TLC)法、總灰分及特定成分含量測(cè)定法[13]進(jìn)行質(zhì)量控制，其中《廣西壯藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(第二卷)對(duì)檢測(cè)方法作了規(guī)范。近年來(lái)，質(zhì)量評(píng)價(jià)方法逐漸多元化，但均存在一定局限性。TLC法可實(shí)現(xiàn)定性鑒別，但分離效能有限，難以準(zhǔn)確定量分析[14]；紫外分光光度法多針對(duì)總黃酮、總香豆素等大類成分進(jìn)行測(cè)定，特異性較差，易受雜質(zhì)干擾；單一成分含量測(cè)定法雖操作簡(jiǎn)便，但無(wú)法反映藥材整體質(zhì)量，難以全面評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地樣品的化學(xué)異質(zhì)性[15]。DNA條形碼技術(shù)法[16?18]和近紅外光譜(NIRS)法[19]也被嘗試用于藥材真?zhèn)舞b別和快速篩查。但DNA條形碼技術(shù)法對(duì)根莖類藥材及加工品效果欠佳，且難以反映代謝產(chǎn)物差異[20?21]；NIRS法雖快速無(wú)損，但模型建立依賴大量代表性樣本，對(duì)地理變異大的野生藥材普適性有限，且難以提供具體的化學(xué)成分信息[22?23]。當(dāng)前針對(duì)五指毛桃的研究存在以下局限：國(guó)內(nèi)外研究多集中于栽培品的質(zhì)量評(píng)價(jià)(如HPLC指紋圖譜技術(shù))或單一成分的藥理機(jī)制，而對(duì)來(lái)源復(fù)雜、受環(huán)境影響更大的兩廣地區(qū)野生五指毛桃，其產(chǎn)地差異性與整體質(zhì)量異質(zhì)性仍缺乏系統(tǒng)性、多維度的科學(xué)評(píng)價(jià)[24?26]?，F(xiàn)有研究未能充分利用指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，深入解析野生資源的特征性化學(xué)模式及其與產(chǎn)地環(huán)境的關(guān)系。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法，建立HPLC指紋圖譜，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，對(duì)采集自兩廣地區(qū)的16批次野生五指毛桃進(jìn)行系統(tǒng)性多維質(zhì)量評(píng)價(jià)。通過(guò)構(gòu)建特征圖譜與量化模型，揭示產(chǎn)地質(zhì)量異質(zhì)性特征，并建立基于成分群特征的質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。該方法突破了傳統(tǒng)單一指標(biāo)(如僅依賴補(bǔ)骨脂素含量)或栽培品導(dǎo)向的評(píng)價(jià)模式，為道地野生藥材鑒別提供更科學(xué)精細(xì)的新策略，推動(dòng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)化，為藥材開(kāi)發(fā)與利用提供參考依據(jù)。

 

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-20A型，配紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器，日本島津公司。超純水系統(tǒng)：CD-UPT-I-10T型，成都越純科技有限公司。超聲系統(tǒng)：KQ-300VSM型，昆山市超聲儀器有限公司。恒溫水浴鍋：HH-2數(shù)顯型，國(guó)華常州儀器制造有限公司。電子天平：GL224I-1SCN型，感量分別為0.01、0.1 mg，德國(guó)賽多利斯公司。補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素對(duì)照品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)均不小于99%，批號(hào)分別為RP220515、RP210105、RP210721、RP220515，成都麥德生科技有限公司。甲醇：色譜純，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司。磷酸：色譜純，重慶川東化工有限公司。樣品：16批五指毛桃樣品來(lái)自廣西、廣東，具體信息見(jiàn)表1。

表1   五指毛桃來(lái)源信息

Tab. 1   Source information table of Ficus hirta Vahl

 

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGⅢ 色譜柱(150 mm×4.6 mm，3 μm，日本資生堂公司)；流動(dòng)相：A相為甲醇，B相為0.4%(體積分?jǐn)?shù))磷酸溶液；流量：0.5 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：10 μL；洗脫方式：梯度洗脫，梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

表2   梯度洗脫程序

Tab. 2   Gradient elution program

 

1.3 溶液制備

對(duì)照品儲(chǔ)備溶液：分別精密稱取補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素對(duì)照品適量，以甲醇溶解，定容，搖勻，得到補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素質(zhì)量濃度分別為1.01、1.03、1.00、1.02 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液?；旌蠈?duì)照品溶液Ⅰ：精密吸取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1.0 mL，置于同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至標(biāo)線，搖勻，得4種對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為0.101、0.103、0.100、0.102 mg/mL的混合對(duì)照品溶液Ⅰ。混合對(duì)照品溶液Ⅱ：精密吸取混合對(duì)照品溶液Ⅰ 1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至標(biāo)線，搖勻，得4種對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為0.010 1、0.010 3、0.010 0、0.010 2 mg/mL的混合對(duì)照品溶液Ⅱ。系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備溶液0.002、0.100、0.400、0.800、1.000、1.500 mL，木犀草素儲(chǔ)備溶液0.002、0.005、0.020、0.100、0.200、0.400 mL，佛手柑內(nèi)酯儲(chǔ)備溶液0.002、0.005、0.020、0.200、0.400、0.800 mL，芹菜素儲(chǔ)備溶液0.002、0.005、0.020、0.200、0.400、0.800 mL于6只10.00 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，制得補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量濃度分別為0.2、10、40、80、100、150 μg/mL，木犀草素的質(zhì)量濃度分別為0.5、0.5、2、10、20、40 μg/mL，佛手柑內(nèi)酯、芹菜素的質(zhì)量濃度均分別為0.2、0.5、2、20、40、80 μg/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。空白溶液：取甲醇作為空白溶液。

1.4 樣品處理

取各批次五指毛桃樣品，置于60 ℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重。粉碎，過(guò)3#篩(孔徑為355 μm)，得均勻粉末。精密稱取約1.0 g粉末，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，準(zhǔn)確稱定質(zhì)量。于85 ℃條件下加熱回流提取30 min，取出后冷卻至室溫，再次稱定質(zhì)量(若有失重，用甲醇補(bǔ)足至初始質(zhì)量)。將提取液轉(zhuǎn)移至離心管，以5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min。取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔有機(jī)濾膜過(guò)濾，收集續(xù)濾液，作為樣品溶液。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

取樣品溶液、混合對(duì)照品溶液溶液Ⅱ，在1.2色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012.130723版本)，建立五指毛桃標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，分別計(jì)算各批次樣品標(biāo)準(zhǔn)圖譜相似度，并對(duì)16批樣品指紋圖譜共有色譜峰面積進(jìn)行聚類分析和主成分分析。

 

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

針對(duì)補(bǔ)骨脂素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素及木犀草素的液相色譜同步分析需求，色譜柱的選擇對(duì)分離效果和檢測(cè)準(zhǔn)確性具有決定性影響[27]。考察了3種不同填料的色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGⅢ柱(150 mm×4.6 mm，3 μm，反相十八烷基硅烷固定相)、Merck SeQuant ZIC-HILIC柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm，親水作用色譜固定相)、Phenomenex Kinetex C18柱(100 mm×4.6 mm，2.6 μm，核殼型C18固定相)。CAPCELL PAK C18 MGⅢ色譜柱表現(xiàn)出最優(yōu)異的分離性能，對(duì)目標(biāo)化合物具有最佳的保留特性和分離效果；HILIC色譜柱作為親水作用色譜柱，對(duì)弱極性的補(bǔ)骨脂素保留能力不足，柱平衡時(shí)間較長(zhǎng)，影響分析效率；Kinetex C18色譜柱載樣量較低，不適用于高濃度樣品分析，對(duì)基質(zhì)復(fù)雜的五指毛桃粗提物的分離能力有限。綜合考慮，選擇CAPCELL PAK C18 MGⅢ色譜柱。

2.2 樣品處理?xiàng)l件的優(yōu)化

參考文獻(xiàn)[28]，針對(duì)五指毛桃成分復(fù)雜的特點(diǎn)，分別考察了不同提取溶劑[50%甲醇(體積分?jǐn)?shù)，下同)溶液、甲醇]、不同提取方法(超聲提取、水浴回流提取)及不同提取時(shí)間(20、30、40 min)對(duì)提取效果的影響。結(jié)果表明，采用提取溶劑為50%甲醇溶液、超聲提取時(shí)間為20 min時(shí)，提取物成分較少、雜質(zhì)較多、分離效果較差；而提取時(shí)間延長(zhǎng)至30、40 min時(shí)，提取時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)結(jié)果差異不顯著。綜合比較，選擇沸點(diǎn)較低、易于回收的甲醇作為提取溶劑，采用水浴回流提取法，提取時(shí)間為30 min。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密吸取樣品溶液(樣品編號(hào)為S3)、混合對(duì)照品溶液Ⅱ及空白溶液，在1.2色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，樣品溶液、混合對(duì)照品溶液Ⅱ、空白溶液色譜圖如圖1所示。從圖1中可以看出，樣品溶液色譜圖與對(duì)照品溶液色譜圖的保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，各組分色譜峰分離度均符合要求，且空白溶液無(wú)干擾，表明該方法專屬性良好。

圖1   樣品溶液、混合對(duì)照品溶液Ⅱ、空白溶液色譜圖

Fig. 1   Chromatographic diagram of sample solution， mixed reference solution II and blank solution

1—補(bǔ)骨脂素； 2—木犀草素； 3—佛手柑內(nèi)酯； 4—芹菜素

2.4 線性方程與檢出限

取系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在1.2色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，以各對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算線性方程和相關(guān)系數(shù)。將對(duì)照品儲(chǔ)備液不斷用甲醇稀釋并檢測(cè)，分別以3倍信噪比和10倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度計(jì)算方法檢出限和定量限，補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素質(zhì)量濃度的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見(jiàn)表3。由表3可知，補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素的質(zhì)量濃度在各自范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限為0.03～0.05 μg/mL，定量限為0.08～0.2 μg/mL。

表3   補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素質(zhì)量濃度的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

Tab. 3   Linear ranges，linear equations，correlation coefficients，limits of detection (LOD)，and limits of quantitation (LOQ) for the mass concentrations of psoralen，luteolin，bergapten，and apigenin

 

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取樣品(編號(hào)為S3)1.0 g，按1.4制備樣品溶液，在1.2色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以補(bǔ)骨脂素(峰5)為參照峰，計(jì)算各共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)色譜峰面積。結(jié)果表明，各共有色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于1.0%，相對(duì)色譜峰面積的RSD均小于1.7%(n=6)，表明方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取樣品(編號(hào)為S3) 1.0 g，按1.4方法制備樣品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、24 h，在1.2色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以補(bǔ)骨脂素(峰5)為參照峰，計(jì)算各共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)色譜峰面積。結(jié)果表明，各共有色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%，相對(duì)色譜峰面積的RSD均小于2.0%(n=6)，表明樣品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密稱取樣品(編號(hào)為S3)1.0 g，按照樣品中目標(biāo)組分與對(duì)照品1∶0.5的質(zhì)量比，分別加入補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素對(duì)照品，按1.4方法制備6份加標(biāo)樣品溶液，測(cè)定樣品中補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素的質(zhì)量，計(jì)算加標(biāo)回收率，加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，補(bǔ)骨脂素、木犀草素、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素的平均回收率分別為95.6%、87.7%、87.3%、87.0%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

表4   樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 4   Results of samples spiked recovery

 

2.8 指紋圖譜

2.8.1 HPLC指紋圖譜的建立與共有峰指認(rèn)

分別精密稱取16批樣品各1.0 g，按1.4方法制備樣品溶液，在1.2色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄40 min之內(nèi)的色譜圖。將16批不同產(chǎn)地樣品的色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行分析。以S1樣品色譜圖為參照，設(shè)定時(shí)間窗寬度為0.1 min，采用多點(diǎn)校正和標(biāo)記峰匹配，生成對(duì)照指紋圖譜(R)和16批樣品的HPLC指紋圖譜，如圖2所示。將參照譜圖(S1)的保留時(shí)間和峰面積記為1，計(jì)算不同產(chǎn)地五指毛桃樣品各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。從圖2中可以看出，共標(biāo)定出9個(gè)共有色譜峰，與混合對(duì)照品溶液的色譜圖比對(duì)，確認(rèn)出4個(gè)色譜峰，分別為補(bǔ)骨脂素(色譜峰5)、木犀草素(色譜峰6)、佛手柑內(nèi)酯(色譜峰7)、芹菜素(色譜峰8)。

圖2   16批次不同產(chǎn)地五指毛桃HPLC疊加指紋圖譜和對(duì)照指紋圖譜

Fig. 2   HPLC superimposed fingerprint and control fingerprint （R） of 16 batches for Ficus hirta Vahl

2.8.2 相似度分析

采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012.130723版本)，經(jīng)多點(diǎn)校正和標(biāo)記峰匹配后生成對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，分析結(jié)果見(jiàn)表5。16批五指毛桃指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行相似度比較，4批樣品相似度大于0.900，11批樣品相似度為0.702～0.896，1批樣品相似度為0.525，這表明不同產(chǎn)地五指毛桃的化學(xué)成分組成整體上具有相關(guān)性，但多數(shù)樣品間存在明顯差異，且個(gè)別樣品差異極為顯著，這反映了不同產(chǎn)地對(duì)五指毛桃化學(xué)成分具有重要影響。

表5   16批不同產(chǎn)地五指毛桃樣品相似度評(píng)價(jià)結(jié)果

Tab. 5   Similarity evaluation results of 16 batches of Ficus hirta Vahl

 

2.8.3 聚類分析(HCA)

采用IBM SPSS Statistics 27.0分析軟件進(jìn)行聚類分析(HCA)，以16批不同產(chǎn)地五指毛桃樣品HPLC指紋圖譜的9個(gè)共有峰的峰面積百分比為特征變量，采用組間連接法，以歐式平方距離為樣品間距離對(duì)樣品進(jìn)行聚類分析，16批五指毛桃聚類分析圖如圖3所示。從圖3中可以看出，當(dāng)歐式平方距離為15時(shí)，16批不同產(chǎn)地五指毛桃可以聚為三大類，其中S1、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10、S11、S12、S13、S15、S16聚為第Ⅰ類，S2、S3聚為第Ⅱ類，S14單獨(dú)聚為第Ⅲ類；當(dāng)歐式平方距離為25時(shí)，16批不同產(chǎn)地五指毛桃樣品可以聚為兩大類，其中S1～S13、S15、S16聚為第Ⅰ類；S14單獨(dú)聚為第Ⅱ類。表明16批不同產(chǎn)地五指毛桃樣品之間存在一定差異，可能與土壤、采收季節(jié)、生長(zhǎng)年限有關(guān)。

圖3   16批五指毛桃聚類分析圖

Fig. 3   HCA of 16 batches of Ficus hirta Vahl

2.8.4 主成分分析(PCA)

主成分分析(PCA)是一種在多元統(tǒng)計(jì)分析中常用的方法，用于降低數(shù)據(jù)的維度，保留數(shù)據(jù)集中的主要變化特征。以16批五指毛桃指紋圖譜中的9個(gè)共有色譜峰的峰面積為變量，利用IBM SPSS Statistics 27.0分析軟件進(jìn)行主成分分析，方差分析結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知，共提取出3個(gè)特征值大于1的主成分(1、2、3)，3個(gè)主成分方差貢獻(xiàn)率依次為46.777%、23.826%、12.371%，累積貢獻(xiàn)率為82.974%。各主成分與變量間的相關(guān)性強(qiáng)度與載荷絕對(duì)值呈正相關(guān)，主成分載荷矩陣見(jiàn)表7。由表7可知，主成分1主要代表峰1、峰2、峰3、峰4、峰6(木犀草素)、峰8、峰9；主成分2主要代表峰5(補(bǔ)骨脂素)、峰7(佛手柑內(nèi)酯)；主成分3主要代表峰8(芹菜素)。

表6   主成分方差分析結(jié)果

Tab. 6   Results of principal component analysis of variance

注：以前3種成分的初始特征值作為提取載荷平方和。

 

表7   主成分載荷矩陣

Tab. 7   Principal component load matrix

 

根據(jù)主成分載荷矩陣計(jì)算3個(gè)主成分得分，將16批五指毛桃樣品各特征向量標(biāo)準(zhǔn)化，代入主成分得分表達(dá)式中計(jì)算3個(gè)主成分得分，以主成分方差貢獻(xiàn)率為權(quán)重系數(shù)，計(jì)算各主成分因子綜合得分排序，結(jié)果見(jiàn)表8。由表8可知，樣品S14綜合得分為2.08高于其他批次，單獨(dú)聚為Ⅰ類；其余15批樣品聚為第Ⅱ類。該分類結(jié)果與系統(tǒng)聚類分析中以歐氏平方距離為25時(shí)的聚類結(jié)果完全一致。

表8   主成分因子得分及排序

Tab. 8   Principal component factor score and sorting

 

以主成分特征值大于1作為提取標(biāo)準(zhǔn)得到3個(gè)主成分，碎石圖如圖5所示。從圖5中可以看出，拐點(diǎn)前3個(gè)特征值均大于1，曲線坡度陡峭，斜率較大；拐點(diǎn)后7個(gè)特征值均小于1，曲線坡度平緩，斜率較小。說(shuō)明可以使用這3個(gè)主成分評(píng)價(jià)五指毛桃的質(zhì)量。

圖4   主成分碎石圖

Fig. 4   Principal component gravel diagram

 

3 結(jié)論

建立了五指毛桃的高效液相色譜指紋圖譜分析方法，得到標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖。通過(guò)對(duì)色譜柱、提取溶劑及提取時(shí)間等關(guān)鍵參數(shù)的系統(tǒng)優(yōu)化，確立了分離效果好、重現(xiàn)性高且準(zhǔn)確度可靠的分析條件。在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了五指毛桃指紋圖譜的共有模式，標(biāo)定了9個(gè)共有峰，并進(jìn)一步確認(rèn)其中4個(gè)為特征峰，對(duì)特征峰及其相關(guān)性進(jìn)行了深入探討。16批次不同產(chǎn)地的五指毛桃樣品中，4批次樣品相似度高于0.900，11批次相似度為0.702～0.896，另1批次相似度為0.525。對(duì)16批次的五指毛桃樣品進(jìn)行了聚類分析和主成分分析，聚類分析將樣品分為3類；主成分分析則提取出3個(gè)主成分，有效反映了不同產(chǎn)地五指毛桃樣品共有成分的關(guān)聯(lián)特征。建立的五指毛桃高效液相指紋圖譜法能夠有效地控制與評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地五指毛桃的質(zhì)量提供了參考依據(jù)。

 

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