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摘  要

 

Abstract

 

目的：通過(guò)對(duì)《中國(guó)藥典》2020 年版收載種子類藥材進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并以青葙子及其混淆品雞冠花子的鑒別研究為實(shí)例，對(duì)我國(guó)種子類藥材的監(jiān)管提出建議。方法：對(duì)《中國(guó)藥典》2020 年版收載種子類藥材進(jìn)行數(shù)據(jù)采集、拆分、統(tǒng)計(jì)和分析；收集青葙子和雞冠花子的多批樣品，分別進(jìn)行體式顯微鏡、掃描電子顯微鏡等設(shè)備觀察、比較兩者特征。結(jié)果與結(jié)論：從長(zhǎng)度、寬度、厚度的數(shù)據(jù)范圍來(lái)看，超過(guò)50% 的《中國(guó)藥典》2020 年版收載種子類藥材的大小都集中在1cm 以下，部分長(zhǎng)度（或直徑）數(shù)據(jù)精度達(dá)到0.01cm（0.1mm）。普通解剖鏡難以達(dá)到要求，建議在監(jiān)管檢驗(yàn)中使用體式顯微鏡，甚至電鏡等儀器進(jìn)行觀察、測(cè)量。本文實(shí)例青葙子和雞冠花子在形狀、大小和表面構(gòu)造特征上存在區(qū)別；在微形態(tài)與微性狀特征上具有更為穩(wěn)定的區(qū)別，其中種臍、表面紋理是主要鑒別點(diǎn)。

 

Objective: To put forward suggestions for the supervision of medicinal seeds in China through statistical analysis of medicinal seeds in the Chinese Pharmacopoeia (2020 Edition) and a case study of differentiating between Celosiae Semen and its adulterant cockscomb seeds. Methods: Data on medicinal seeds in the Chinese Pharmacopoeia (2020 Edition) was collected, classified, calculated and analyzed. Several batches of Celosia argentea and Celosia cristata seed samples were collected and stereomicroscope and scanning electron microscope were used to observe and compare their characteristics.Results and conclusion: With respect to data on length, width and thickness, more than 50% of the medicinal seeds in the Chinese Pharmacopoeia were less than 1cm in size, and the accuracy of some length (or diameter) data reached 0.01cm (0.1mm). It is suggested that stereoscope, even electron microscope and other instruments be used for observation and measurement. There are differences in the shape, size and surface structure between the seeds of Celosia argentea and Celosia cristata, among which, hilum and surface texture are the main identification points.

 

關(guān)鍵詞

 

Key words

 

種子類藥材；統(tǒng)計(jì)分析；青葙子；雞冠花子；監(jiān)管建議

 

medicinal seeds; statistical analysis; Celosiae Semen; Celosiae Cristatae Flos Semen; regulatory recommendations

 

種子類藥材系指使用植物的種子、種仁、假種皮作為藥用部位的藥材[1]。全草類、花類、果實(shí)類藥材中也大多含有種子，部分單心皮果實(shí)類藥材如火麻仁在性狀上與種子類藥材相近。由于種子普遍較小，不同種子相似程度高，種子的性狀檢驗(yàn)一直是中藥民族藥監(jiān)管工作中的難點(diǎn)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外種子鑒別研究取得了一定的成果[2]，但缺少對(duì)種子類藥材藥品標(biāo)準(zhǔn)性狀項(xiàng)文本的統(tǒng)計(jì)分析。本文研究對(duì)《中國(guó)藥典》2020 年版一部收載的499 種植物藥材中47 個(gè)以種子、種仁為藥用部位的種子類藥材進(jìn)行了性狀項(xiàng)大小描述文本的統(tǒng)計(jì)分析和實(shí)例研究，擬為種子類中藥材的日常監(jiān)管提供技術(shù)支持。

 

1種子類藥材標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計(jì)分析

 

1.1 種子類藥材標(biāo)準(zhǔn)的納入與排除

 

本文統(tǒng)計(jì)分析的目的是歸納種子類藥材標(biāo)準(zhǔn)性狀描述的整體情況，因此，收集時(shí)主要納入以描述種子為主的藥材標(biāo)準(zhǔn)文本，包括：①部位為植物學(xué)定義上的種子（seed）的藥材標(biāo)準(zhǔn)；②部位為植物學(xué)定義上的種子一部分的藥材標(biāo)準(zhǔn)，包含種子團(tuán)、種仁、胚乳、茸毛等，如大風(fēng)子仁。

 

標(biāo)準(zhǔn)文本的主要性狀描述不是種子的應(yīng)排除，包括：①部位為含有種子的果實(shí)、花、全草的藥材標(biāo)準(zhǔn)，如部位為閉果的藥材標(biāo)準(zhǔn)，如紫蘇子、牛蒡子，其很難分清種皮和果皮。②部位的原料為種子，但形態(tài)改變較大的，包括脂肪油類、粉末、霜類、發(fā)芽類、發(fā)酵類、加工類，如巴豆霜、大豆黃卷、淡豆豉等。③為了性狀統(tǒng)計(jì)的一致性，暫不收錄假種皮為部位的藥材標(biāo)準(zhǔn)。

 

1.2《中國(guó)藥典》種子類藥材的名錄

 

標(biāo)準(zhǔn)文本的出處主要包括《中國(guó)藥典》2020 年版。多基原種子類藥材，每個(gè)基原分開統(tǒng)計(jì)。根據(jù)以上原則可得出，47 個(gè)種子類藥材品種覆蓋了33 個(gè)科63 個(gè)基原，詳見表1。

 

 

1.3《中國(guó)藥典》2020年版種子類藥材標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計(jì)

 

63 個(gè)種子類藥材基原中，藥用部位為“干燥成熟種子”有59個(gè)，占總數(shù)的94% ；3 個(gè)“干燥成熟種仁”，占5% ；1 個(gè)“干燥近成熟種子”，占1%。本研究統(tǒng)計(jì)按照《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》（第四版）國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥）正文各論編寫細(xì)則的要求，對(duì)《中國(guó)藥典》2020 年版中的47 個(gè)種子類藥材63 個(gè)基原的大小進(jìn)行了長(zhǎng)度、寬度（含直徑）、厚度的數(shù)據(jù)拆分并計(jì)算均數(shù)，對(duì)每個(gè)數(shù)值的藥材基原進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得到了《中國(guó)藥典》2020 年版收載種子類大小的總體分布數(shù)據(jù)，結(jié)果詳見表2。同時(shí)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)文本中的長(zhǎng)寬數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)了各種子類藥材的種形指數(shù)。種形指數(shù)（長(zhǎng)寬比）是種子檢驗(yàn)中常用的比較穩(wěn)定的性狀特征，在瓜蔞子[3]、何首烏種子[4-5]、山茱萸種子[6] 的研究中得到了較好的應(yīng)用。本研究統(tǒng)計(jì)種形指數(shù)及其偏差的計(jì)算結(jié)果詳見表3。

 

 

2青葙子、雞冠花子的鑒別研究實(shí)例

 

青葙子、雞冠花子均為細(xì)小種子，形態(tài)極為相似。目前鑒別方法的研究集中在性狀、顯微結(jié)構(gòu)等方面。其中，性狀鑒別方法由于其快速、簡(jiǎn)便應(yīng)用較多，現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道集中在藥材形狀、種臍形狀兩個(gè)特征[7]，也有利用藥材上殘留花柱的方法進(jìn)行鑒別[8]。但是性狀鑒別方法也存在一定的問(wèn)題：如對(duì)種臍偏向一側(cè)的程度、扁圓形和腎形的判斷存在主觀差異，殘留花柱不易找到等。顯微結(jié)構(gòu)鑒別方法特點(diǎn)快速且特征更加穩(wěn)定，現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道集中在種皮表皮細(xì)胞、種皮內(nèi)層細(xì)胞、胚乳細(xì)胞等的比較、種子形狀、種臍、種皮紋理的微形態(tài)比較[9-13]。現(xiàn)有顯微結(jié)構(gòu)鑒別方法也存在一定的問(wèn)題，如種子橫切難度大，外表皮較厚透光差；種子表面紋理間的區(qū)別主觀性大等。其他的鑒別方法還有傅立葉變換紅外吸收光譜[14-15]、導(dǎo)數(shù)光譜[16]、ITS2序列鑒別[17]、蛋白電泳[18]、差熱分析法[19]、氨基酸和無(wú)機(jī)元素含量分析[20]、脂肪酸類成份比較等[21]。

 

因此，本文以青葙子、雞冠花子為例嘗試使用統(tǒng)計(jì)結(jié)論開展進(jìn)一步鑒別研究。

 

2.1 樣品

 

本研究共收集青葙子（莧科植物青葙Celosia argentea L. 的干燥成熟種子）3 批，以及雞冠花子（ 莧科植物雞冠花Celosia cristata L. 的干燥成熟種子）3 批。樣品由中國(guó)食品藥品檢定研究院張南平主任藥師鑒定，并保存與中國(guó)食品藥品檢定研究院中藥所標(biāo)本館。

 

2.2 儀器

 

ZEISS Axio Zoom.V16 德國(guó)蔡司公司體式熒光變倍顯微鏡，Phenom Pure plus 美國(guó)飛納公司掃描電子顯微鏡。

 

2.3 方法

 

2.3.1 微性狀方法

 

前處理：直接觀察或沿與種臍平行的軸橫切后用雙面膠固定觀察。在體式顯微鏡下，分別使用12 倍和80 倍在明場(chǎng)白光、藍(lán)光激發(fā)綠色熒光、黃光激發(fā)紅色熒光、紫外光激發(fā)藍(lán)色熒光四個(gè)光采集通道觀察。圖像處理采用在Z 軸方向連續(xù)拍攝不同對(duì)焦面的照片，用景深擴(kuò)展方法對(duì)獲得的特征照片進(jìn)行合成，獲得清晰的特征圖像。

 

2.3.2 微形態(tài)方法

 

前處理：樣品經(jīng)50% 乙醇超聲清洗1 min，干燥后用導(dǎo)電雙面膠固定，離子濺射真空鍍金后觀察。觀察方法：使用SE 或BSE成像模式，高真空條件，加速電壓15 kV，標(biāo)準(zhǔn)束流強(qiáng)度，拍攝不同放大倍數(shù)下的種子特征照片。

 

2.4 結(jié)果

 

2.4.1 青葙子與雞冠花子的微性狀

 

青葙子常為扁圓形，少數(shù)呈圓形或腎形，直徑1.0~1.5mm ；雞冠花子扁圓形或腎形，表面常凹陷，直徑1.0~1.8mm，體式鏡下易于觀察（圖1、圖2）。

 

 

青葙子種臍呈果柄形，少數(shù)略偏向一側(cè)；雞冠花子種臍呈鳥喙形，偏向一側(cè)，體式鏡下易于觀察（圖3、圖4）。種臍正面觀時(shí)，青葙子種孔常在種臍側(cè)面或被種臍遮擋；雞冠花子種孔常位于正面，體式鏡下可觀察（圖5、圖6），電子顯微鏡下易于觀察（圖7-10）。

 

 

2.4.2 青葙子與雞冠花子在橫切面上的異同

 

在明場(chǎng)通道下，青葙子和雞冠花子的橫切面中間均為淺色近透明的胚乳，兩端為白色的胚。青葙子橫切面中間隆起明顯，隆起處種皮增厚（20~35μm）。雞冠花子中間隆起不明顯，呈弓形，隆起處種皮不增厚（16~30μm）。在DS-RED、 GFPNB 和UV 熒光通道下，青葙子和雞冠花子的胚乳幾乎不發(fā)出熒光，胚均受激發(fā)出熒光（圖11、圖12），電子顯微鏡下均易觀察（圖13、圖14）。

 

 

2.5 結(jié)論與討論

 

青葙子和雞冠花子在整體形狀大小、種臍形狀、種孔位置、橫切面上有較為明顯的區(qū)別。青葙子圓形或扁圓形，少數(shù)腎形， 直徑1.0~1.5mm， 種臍果柄形，多數(shù)不偏向一側(cè)；種孔常位于種臍側(cè)面或?yàn)榉N臍遮擋；從橫切面觀察，其中部隆起明顯，隆起處種皮較厚。雞冠花子扁圓形或腎形， 表面常凹陷， 直徑1.0~1.8mm，種臍鳥喙形，偏向一側(cè)；種孔明顯；從橫切面觀察，中間隆起不明顯，橫切面呈弓形，隆起處種皮不增厚。詳見表4。

 

表4　青葙子和雞冠花子性狀、顯微特征區(qū)別表

 

 

3監(jiān)管建議

 

從長(zhǎng)度、寬度、厚度的數(shù)據(jù)范圍來(lái)看，超過(guò)50% 的種子長(zhǎng)度、寬度（直徑）、厚度都集中在1cm 以下，部分?jǐn)?shù)據(jù)精度達(dá)到0.01cm（0.1mm）。普通解剖鏡難以達(dá)到此精度要求，建議在監(jiān)管中推廣使用體式顯微鏡，甚至電鏡等儀器進(jìn)行觀察、測(cè)量。同時(shí)，還需進(jìn)一步加強(qiáng)表面特征的觀察總結(jié)。例如，青葙子的表面網(wǎng)格狀紋理是其穩(wěn)定的特征，已收入《新編中藥志》和《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，在《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)提升中建議考慮。

 

通過(guò)本次統(tǒng)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)，大部分《中國(guó)藥典》收載品種都可以計(jì)算種形指數(shù)，且可通過(guò)種形指數(shù)的偏差，數(shù)量化的描述反映種子的形狀。特別是多基原品種更需要通過(guò)種形指數(shù)特征進(jìn)行鑒別。例如，瓜蔞子的兩個(gè)基原中雙邊栝樓種子長(zhǎng)、寬兩個(gè)邊界值分別得到的兩個(gè)種形指數(shù)為1.88、1.90，偏差為1.32%，而栝樓種子的兩個(gè)種形指數(shù)2.00、1.50，偏差為28.57%，數(shù)量化的描述了兩者形狀的差別。但是，部分種子缺少長(zhǎng)、寬數(shù)值，無(wú)法通過(guò)種形指數(shù)反映種子形狀上的穩(wěn)定特征，例如，青葙子僅有直徑（寬）值，而青葙子的長(zhǎng)寬比是青葙屬與同科莧屬的重要區(qū)別點(diǎn)。對(duì)于多基原種子類藥材和種形指數(shù)是其植物分類學(xué)重要鑒定特征的種子類藥材來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)、寬、厚數(shù)值是值得測(cè)量和總結(jié)的，建議在藥品監(jiān)管工作中特別是標(biāo)準(zhǔn)制修訂時(shí)予以重視。