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嘉峪檢測網(wǎng) 2026-02-08 10:26
摘要
生物制品成分多樣，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)擬定。生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究建立系綜合藥學(xué)、臨床前、臨床試驗(yàn)研究及上市后研究結(jié)果開發(fā)、確認(rèn)和不斷完善的過程，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究貫穿整個(gè)藥品的生命周期。本文結(jié)合國際技術(shù)指南及實(shí)際審評案例，對生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及建立的一般原則進(jìn)行了探討，以期為生物制品研發(fā)和評價(jià)工作提供參考。
作者：李敏，常衛(wèi)紅
國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，北京
藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是基于產(chǎn)品的質(zhì)量屬性(quality attribute，QA)，為確保獲得預(yù)期的產(chǎn)品質(zhì)量，而對產(chǎn)品處于適當(dāng)限制、范圍或分布內(nèi)的物理、化學(xué)、生物或微生物性質(zhì)或特性進(jìn)行控制的技術(shù)要求[1]。生物制品通常由生物大分子組成，成分及結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生產(chǎn)工藝的差異可能導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量及QA的不同，因此較難仿制，即便是同類產(chǎn)品，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定往往也難以完全套用已上市產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，需基于早期研發(fā)數(shù)據(jù)，按照具體情況具體分析的原則擬定符合產(chǎn)品特點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)由放行檢驗(yàn)項(xiàng)目、分析方法和可接受標(biāo)準(zhǔn)組成，其制定過程包括了放行檢驗(yàn)項(xiàng)目的確定、分析方法的建立及驗(yàn)證、可接受標(biāo)準(zhǔn)的確定、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的建立等方面[2]。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究確定貫穿整個(gè)藥品的研發(fā)階段，其在產(chǎn)品的整個(gè)生命周期中會(huì)隨著對產(chǎn)品理解的深入以及風(fēng)險(xiǎn)評估發(fā)生相應(yīng)的變化。因此，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的管理也是產(chǎn)品生命周期管理中的重要事項(xiàng)。如何通過整個(gè)研發(fā)階段擬定合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)系藥品注冊及上市評價(jià)的重要考慮點(diǎn)。本文就生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定過程及關(guān)注重點(diǎn)進(jìn)行綜述。
01、放行檢驗(yàn)項(xiàng)目的確定
放行檢驗(yàn)項(xiàng)目需根據(jù)產(chǎn)品QA研究結(jié)果進(jìn)行確定[2]，由于生產(chǎn)工藝或處方不同導(dǎo)致產(chǎn)品雜質(zhì)譜可能不同，且相同的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)對不同品種的安全性和有效性的影響也不同，如非巖藻糖修飾對已上市大多數(shù)單抗的有效性無顯著影響，但顯著影響利妥昔單抗的有效性[3]，因此，將何種項(xiàng)目納入放行檢驗(yàn)需根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)擬定。
1.1 QA的分類
QA是指物理、化學(xué)、生物學(xué)、微生物學(xué)等特性，其變化會(huì)對產(chǎn)品的安全性和有效性產(chǎn)生潛在的影響[1，4]。因此，對產(chǎn)品QA的全面結(jié)構(gòu)確證及產(chǎn)品特性分析是產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的重要基礎(chǔ)。生物制品的QA研究及特性分析研究可分為以下幾類[2，5]:①產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)/雜質(zhì)。雜質(zhì)一般分為產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)/雜質(zhì)、工藝相關(guān)雜質(zhì)。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包括由于理化特異質(zhì)性導(dǎo)致的各種分子變異體，應(yīng)對目標(biāo)產(chǎn)品的各種分子變異體進(jìn)行分離、鑒別和分析，如變異體的活性與目標(biāo)產(chǎn)品一致，可視為產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)。對于生物技術(shù)產(chǎn)品，產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包括聚體、降解產(chǎn)物、電荷異構(gòu)體、疏水變體等;對于各類疫苗，產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包括無活性的病毒顆粒、非目的范圍的多糖、包裝不完整的病毒樣顆粒等。②工藝相關(guān)雜質(zhì)。工藝相關(guān)雜質(zhì)包括細(xì)胞基質(zhì)(宿主細(xì)胞蛋白、宿主細(xì)胞DNA)、細(xì)胞培養(yǎng)物(誘導(dǎo)劑、抗生素或培養(yǎng)基成分)或下游工藝殘留物。③組成及含量。含量一般指蛋白質(zhì)含量(重組產(chǎn)品)或抗原含量(疫苗)，通常選擇適宜的物理化學(xué)方法和(或)免疫化學(xué)方法進(jìn)行測定。④外源病原體。污染物是指帶入的外源性物質(zhì)而不是生產(chǎn)工藝的一部分，如各種微生物、細(xì)菌內(nèi)毒素等。⑤其他規(guī)定的QA。其他QA和產(chǎn)品特性分析包括蛋白結(jié)構(gòu)研究、免疫學(xué)特性及生物活性研究等。具體包括:蛋白制品的一級、二級或高級結(jié)構(gòu)及糖基化、磷酸化、氧化、脫酰胺、二硫鍵等翻譯后修飾分析。生物學(xué)活性是反映生物學(xué)性質(zhì)的重要方法，它是表示產(chǎn)品產(chǎn)生特定生物學(xué)效應(yīng)的具體量值。生物學(xué)活性、體外或體內(nèi)方法(如效價(jià)測定)可作為高級結(jié)構(gòu)確證的補(bǔ)充。免疫化學(xué)特性是采用純化的抗體與抗原確定的區(qū)域進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)測定免疫學(xué)特性。⑥原材料及其他。全面的產(chǎn)品質(zhì)量控制還包括原材料檢測、工藝過程控制、工藝驗(yàn)證、研發(fā)過程中質(zhì)量特性分析、穩(wěn)定性研究和GMP的執(zhí)行等方面。
1.2 關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)
CQA是指與產(chǎn)品安全和有效性直接相關(guān)的QA，需要控制在適當(dāng)?shù)南薅确植挤秶鷥?nèi)，才能確保產(chǎn)品質(zhì)量符合預(yù)定要求的QA[1]。由于生物大分子的復(fù)雜性，生物制品CQA的定義也是隨著研究階段不斷完善的。在評估產(chǎn)品QA是否為CQA時(shí)，主要考慮因素包括:臨床前/臨床/上市后研究數(shù)據(jù)、生產(chǎn)工藝能力、生產(chǎn)工藝連續(xù)性和穩(wěn)定性、同類產(chǎn)品的研究數(shù)據(jù)及技術(shù)規(guī)范(如國內(nèi)外藥典的要求）等。
近年來，隨著質(zhì)量源于設(shè)計(jì)(quality-by-design，QbD)理念在工業(yè)界的實(shí)踐，部分產(chǎn)品采用了定量的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理方法確定潛在CQA的優(yōu)先順序[6－7]。例如，一項(xiàng)以多糖-蛋白結(jié)合疫苗為模型的CQA確認(rèn)研究中，采用“影響度”和“不確定性”將產(chǎn)品QA按照其對產(chǎn)品臨床安全性和有效性的影響的嚴(yán)重性進(jìn)行排序。對于影響度，按照QA對不良事件的影響程度進(jìn)行不同級別定量賦值:非常高(25分)、中等(8分)、最小(2分)。對于不確定性賦值的影響因素主要為目前科學(xué)認(rèn)識(shí)的成熟程度，具體打分情況為:法規(guī)監(jiān)管或科學(xué)界公認(rèn)為最小(1分);已有臨床數(shù)據(jù)驗(yàn)證為低(2分);內(nèi)部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)或內(nèi)部相關(guān)產(chǎn)品數(shù)據(jù)證實(shí)為中等(3分);外部相關(guān)產(chǎn)品文獻(xiàn)數(shù)據(jù)證實(shí)為高(4分);相關(guān)性未知為非常高(5分)。然后根據(jù)公式:嚴(yán)重性(severity)=影響度(impact)×不確定性(uncertainty)，計(jì)算出來的嚴(yán)重性分值對QA進(jìn)行排序，大于等于25分的定義為CQA，10~24分的臨界區(qū)間的QA需通過進(jìn)一步的分析判斷是否為CQA。
1.3 CQA與放行檢驗(yàn)項(xiàng)目
關(guān)于CQA的確定及是否將其納入放行檢驗(yàn)項(xiàng)目，通常的研究策略為:通過早期研發(fā)階段確定QA與產(chǎn)品安全和有效性的相關(guān)性，在此基礎(chǔ)上考慮生產(chǎn)工藝對QA連續(xù)性的影響、貯存過程中的降解情況并結(jié)合是否有適宜的檢測方法，確定是否需將該QA納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。以單抗常見的糖基化控制策略流程為例闡述相關(guān)策略見圖1[8]。筆者認(rèn)為該策略的基本理念可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測項(xiàng)確定的通常考慮。
圖1 單抗糖基化控制策略圖
此外，在對部分CQA或放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目進(jìn)行監(jiān)測時(shí)，由于檢測方法的原因或在監(jiān)管機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他情況下，可將檢測點(diǎn)向工藝上游前移。例如，對于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對DNA、宿主細(xì)胞蛋白等項(xiàng)目進(jìn)行檢測，因此這些檢測項(xiàng)一般在吸附工藝之前的原液階段進(jìn)行檢測。
1.4 產(chǎn)品生命周期與放行檢驗(yàn)項(xiàng)目
產(chǎn)品自研發(fā)開始時(shí)便需要建立一套與其相應(yīng)的系統(tǒng)性的檢測項(xiàng)目。在產(chǎn)品的整個(gè)生命周期(包括臨床前、臨床試驗(yàn)期間、上市前、上市后)中，隨著工藝放大或變更以及研發(fā)經(jīng)驗(yàn)、新知識(shí)的獲得，檢測項(xiàng)目是需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整的。例如，隨著對產(chǎn)品CQA有更好的了解或發(fā)現(xiàn)新的雜質(zhì)，則需要建立新的檢測項(xiàng)目并開發(fā)相應(yīng)的方法。此外，研發(fā)過程中的產(chǎn)業(yè)化放大及工藝變更可能導(dǎo)致產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)/產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)的潛在變化，研發(fā)過程中需評估生產(chǎn)變更對產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的影響[1]。例如，工藝過程引入新的添加物質(zhì)，則需增加相應(yīng)的雜質(zhì)檢測方法。
1.5 藥典要求與放行檢驗(yàn)項(xiàng)目
在放行檢驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)定中，還應(yīng)當(dāng)充分參考注冊國的藥典或者監(jiān)管當(dāng)局的具體規(guī)定，以保證產(chǎn)品放行檢驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)立能夠滿足相關(guān)監(jiān)管法規(guī)的要求。
國內(nèi)外藥典常規(guī)放行檢定項(xiàng)目一般包括以下幾個(gè)方面[5]:鑒別試驗(yàn)、純度和雜質(zhì)、效價(jià)(結(jié)合效價(jià)、體內(nèi)活性、比活等)、含量、安全性試驗(yàn)(包括無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性檢查等)、其他檢測項(xiàng)目(包括外觀、可見異物、不溶性微粒、pH值、滲透壓摩爾濃度、裝量、穩(wěn)定劑和水分測定等)。對于純度，一般推薦機(jī)理互補(bǔ)的原理建立的不同的純度檢測項(xiàng)目。對于效價(jià)，推薦盡可能反映或模擬產(chǎn)品作用機(jī)制或臨床效應(yīng)的效價(jià)檢測方法?？傮w而言，放行檢驗(yàn)檢測項(xiàng)目的選擇需結(jié)合Q A的關(guān)鍵性、產(chǎn)品生產(chǎn)工藝、法規(guī)的要求以及對產(chǎn)品知識(shí)的積累進(jìn)行確定、更新和確認(rèn)。
02、可接受標(biāo)準(zhǔn)(acceptance criteria)
2.1 可接受標(biāo)準(zhǔn)的分類
可接受標(biāo)準(zhǔn)是指原液、制劑或產(chǎn)品生產(chǎn)中間階段的樣品應(yīng)符合的數(shù)值限度、范圍或其他適宜的測量值[2]。對于常規(guī)通用項(xiàng)目，產(chǎn)品限度標(biāo)準(zhǔn)尤其是安全性相關(guān)的項(xiàng)目一般應(yīng)不低于藥典的要求[5]，例如，宿主細(xì)胞DNA殘留量、細(xì)菌內(nèi)毒素等。產(chǎn)品特異的標(biāo)準(zhǔn)需根據(jù)產(chǎn)品特性研究制定，如效力、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)等。
通常，可接受標(biāo)準(zhǔn)系基于多批產(chǎn)品(包括證明生產(chǎn)工藝一致性批次數(shù)據(jù))的統(tǒng)計(jì)分析擬定。但更為重要的是，標(biāo)準(zhǔn)限度的合理性需結(jié)合臨床前和臨床研究批次的數(shù)據(jù)、穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)、產(chǎn)品相關(guān)開發(fā)數(shù)據(jù)等予以充分論證[2]。
2.2 工藝相關(guān)雜質(zhì)的可接受標(biāo)準(zhǔn)
有機(jī)溶劑殘留可參照ICH Q3C按可耐受的日攝入量(TDI)制定限度[9]，或者參照其他已上市藥品相同雜質(zhì)的限度標(biāo)準(zhǔn)制定。如常用的化學(xué)試劑Triton、聚山梨酯-80等。
在沒有同類標(biāo)準(zhǔn)可參照的情況下工藝相關(guān)雜質(zhì)限度標(biāo)準(zhǔn)可結(jié)合非臨床研究和毒理學(xué)數(shù)據(jù)確定。例如，可使用雜質(zhì)安全性因子(impurity safetyfactor，ISF)進(jìn)行潛在的安全性風(fēng)險(xiǎn)評估[6]。ISF是雜質(zhì)50%測試動(dòng)物死亡的雜質(zhì)量(LD50)相對于每劑產(chǎn)品中潛在的雜質(zhì)限度的比值[ISF=LD50÷每劑產(chǎn)品雜質(zhì)限度(level inproductdose)]。對于一些工藝雜質(zhì)可以通過既往的研究資料獲得LD50數(shù)據(jù)，而對于某些工藝雜質(zhì)，如果缺少既往的研究資料，則需要通過毒理學(xué)研究獲取LD50數(shù)據(jù)或未見不良反應(yīng)的劑量水平(noobserved adverseeffects level，NOAEL)。因此，在進(jìn)行相關(guān)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)制定時(shí)，應(yīng)當(dāng)首先考慮滿足較大的ISF，同時(shí)結(jié)合工藝的能力綜合進(jìn)行考慮。
2.3 臨床試驗(yàn)研究結(jié)果與可接受標(biāo)準(zhǔn)
臨床試驗(yàn)研究結(jié)果是保證質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度合理性的最重要方面[2，10－12]。對產(chǎn)品安全性和有效性影響比較大的檢測項(xiàng)目的可接受標(biāo)準(zhǔn)建議不寬于臨床確認(rèn)的限度或范圍。這類檢測項(xiàng)目質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上下限的論證一般主要基于Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗(yàn)用樣品的批次數(shù)據(jù)，但由于用于關(guān)鍵性臨床試驗(yàn)的批次通常很少，可能無法覆蓋正常生產(chǎn)工藝變異的完全范圍，進(jìn)而導(dǎo)致工藝驗(yàn)證無法通過(見圖2)?？墒褂孟嚓P(guān)的臨床前批次和早期臨床試驗(yàn)批次數(shù)據(jù)進(jìn)行補(bǔ)充。對產(chǎn)品安全性和有效性影響相對較小的CQA的可接受標(biāo)準(zhǔn)，可基于工藝能力、或者生產(chǎn)工藝一致性的批次數(shù)據(jù)制定寬于臨床確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)[10，12]。
圖2 工藝能力與臨床經(jīng)驗(yàn)
Ⅱ期劑量探索臨床試驗(yàn)通常包括高中低劑量的研究，其研究結(jié)果可有效用于標(biāo)準(zhǔn)限度合理性的論證，尤其是產(chǎn)品有效成分(如抗原含量、病毒滴度等)及產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)(如糖基化異構(gòu)體、電荷異構(gòu)體等)上下限的論證。由于高劑量組受試者暴露于比正常劑量組更高的雜質(zhì)水平，在獲得高劑量組受試者安全性結(jié)論后，可使用高劑量組雜質(zhì)的暴露量制定正常劑量下的雜質(zhì)限度標(biāo)準(zhǔn)[10，12]。而低劑量給藥組有效性研究數(shù)據(jù)也可為有效成分含量標(biāo)準(zhǔn)下限的合理性提供必要的支持。
放置一定時(shí)間后的批次的臨床研究結(jié)果也可用來作為可接受標(biāo)準(zhǔn)制定的依據(jù)[11]，如效期末產(chǎn)品臨床試驗(yàn)結(jié)果可對產(chǎn)品的貨架期標(biāo)準(zhǔn)及有效成分含量下限的安全、有效性論證提供合理性數(shù)據(jù)。
2.4 可接受標(biāo)準(zhǔn)與穩(wěn)定性研究
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度的擬定應(yīng)考慮在貯藏過程中原液和制劑可能發(fā)生降解;應(yīng)對生產(chǎn)過程中和/或貯存過程中產(chǎn)生的明顯降解產(chǎn)物(產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì))予以分析并納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對于易受貯存過程影響、變化幅度較大且與產(chǎn)品安全、有效性相關(guān)的檢測項(xiàng)目，建議同時(shí)設(shè)置放行標(biāo)準(zhǔn)和貨架期標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，某已上市疫苗以穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)、多批次統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)進(jìn)行體外效力試驗(yàn)(invitrorelative potencyassay，IVRP)限度標(biāo)準(zhǔn)的過程如下(見圖3)[13]:通過評價(jià)25個(gè)半成品批次放行檢驗(yàn)結(jié)果確定相應(yīng)的變異;通過半成品IVRP的變異、半成品穩(wěn)定性譜圖斜率的變異、配制和灌裝過程的變異和分析方法的變異進(jìn)行計(jì)算成品IVRP的變異;通過成品儲(chǔ)存期間穩(wěn)定性譜圖斜率的變異、分析方法的變異和多批產(chǎn)品統(tǒng)計(jì)分析分別擬定了成品IVRP的放行標(biāo)準(zhǔn)和貨架期標(biāo)準(zhǔn)。此外，申請人通過Ⅱ期不同劑量的有效性數(shù)據(jù)論證了貨架期標(biāo)準(zhǔn)能夠保證產(chǎn)品在整個(gè)貯存期間均可保證產(chǎn)品的有效性，結(jié)果顯示20%，40%，60%成品劑量相對100%劑量組的免疫原性均為非劣效。通過該臨床試驗(yàn)，有效地證明了根據(jù)穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)制定的效期內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的合理性。
圖3 某疫苗成品放行標(biāo)準(zhǔn)和效期內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)制定過程示意圖
2.5 分析方法變異與可接受標(biāo)準(zhǔn)
正常的分析方法變異已經(jīng)包含在批次分析數(shù)據(jù)中進(jìn)行評估。在批次分析數(shù)據(jù)較多時(shí)，把方法驗(yàn)證得到的方法變異數(shù)據(jù)再次添加到多批次結(jié)果中制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可能是不合適的，例如，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)=多批次結(jié)果±3SD+方法變異。如果僅有少量的批次分析數(shù)據(jù)，在一定條件下，經(jīng)監(jiān)管方批準(zhǔn)，方法變異則可考慮作為將來多批次數(shù)據(jù)一個(gè)額外的變異來源加以計(jì)算[10]。
2.6 統(tǒng)計(jì)分析方法與可接受標(biāo)準(zhǔn)
用于評估驗(yàn)證指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法依賴于樣本分布的正態(tài)性。如果通過正態(tài)分布、頻數(shù)分布觀察到的數(shù)據(jù)是非正態(tài)分布，須將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成正態(tài)分布[11]。
2.7 可接受標(biāo)準(zhǔn)的生命周期和更新
在產(chǎn)品生命周期中，組成產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要素并不是一成不變，而是會(huì)隨著產(chǎn)品研制階段的不同以及外部法規(guī)環(huán)境等因素的變化而發(fā)生改變，從而導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)隨著發(fā)生變化。例如，對于基于工藝能力制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，需結(jié)合生產(chǎn)批次的數(shù)量進(jìn)行修訂。在研發(fā)早期，由于批次數(shù)據(jù)有限，可以基于工藝一致性研究批次和方法變異制定較寬的范圍。輝瑞公司的一項(xiàng)研究認(rèn)為，從統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的角度，25~30批的數(shù)據(jù)累積可較好的預(yù)測產(chǎn)品的工藝能力;進(jìn)一步累積工藝批次至85批時(shí)可最終確定產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[11]。因此，通常歐洲、美國監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求產(chǎn)品上市累積生產(chǎn)至30批或累積生產(chǎn)3年后需以補(bǔ)充申請方式進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的更新。
03、分析方法及驗(yàn)證
3.1 分析方法的定義
分析方法是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的組成部分，ICH Q6B對分析方法的定義是指進(jìn)行分析的方式，應(yīng)詳細(xì)描述進(jìn)行每個(gè)分析檢測所必需的步驟[2]。它包括但不限于:樣品、參比對照品、試劑的配制、儀器的使用、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、計(jì)算公式的運(yùn)用等。
3.2 分析方法的驗(yàn)證
分析方法驗(yàn)證是證明一個(gè)分析方法具有相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確性和可靠性、適合于其既定用途的過程。分析方法驗(yàn)證是藥品研發(fā)和質(zhì)量控制的關(guān)鍵問題。國際上頒布了一系列的相關(guān)指南或者指導(dǎo)原則。ICH Q2(R1)指南具有廣泛的適用性，該指導(dǎo)原則主要適用于理化分析方法的驗(yàn)證[14]。由于生物技術(shù)產(chǎn)品和生物制品的檢測方法復(fù)雜的特性，生物學(xué)測定方法存在更多的影響因素，中國食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評中心(CDE)于2005年發(fā)布的《生物制品質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)一般原則》則適用于免疫化學(xué)和生物學(xué)試驗(yàn)方法的驗(yàn)證[15]。
方法學(xué)驗(yàn)證一般包括專屬性、準(zhǔn)確性、精密度、線性、范圍、檢測限度、定量限度、耐用性等幾個(gè)指標(biāo)中的一個(gè)或幾個(gè)的研究，用于不同檢測目的的試驗(yàn)方法需進(jìn)行不同參數(shù)的測定[14]。對于經(jīng)常用于純度控制的HPLC方法，除常規(guī)方法學(xué)驗(yàn)證外，應(yīng)考慮結(jié)合強(qiáng)制降解穩(wěn)定性研究對主要峰進(jìn)行“峰歸屬”及對應(yīng)的組分研究。在此基礎(chǔ)上方可選擇適宜的目的峰計(jì)算范圍，并進(jìn)行相關(guān)方法學(xué)驗(yàn)證。對于該方法的準(zhǔn)確性、定量限度、線性、檢測限度等驗(yàn)證，除進(jìn)行主峰研究外，也需針對雜質(zhì)峰予以確認(rèn)。
3.3 藥典方法與非藥典方法
產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法通?？煞譃樗幍浞椒ê头撬幍浞椒?。藥典方法在被確定為標(biāo)準(zhǔn)方法前已經(jīng)過了適當(dāng)?shù)尿?yàn)證。非藥典方法(包括藥典方法的替代方法)一般系源自參考文獻(xiàn)的方法或自建方法。對于各類方法均需進(jìn)行驗(yàn)證，但依方法來源的不同對于驗(yàn)證的要求有所不同。對藥典方法應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)以證明其在實(shí)際使用條件下的適用性[16]，確認(rèn)方案應(yīng)包括，但不僅限于:
①要確認(rèn)的藥典方法，預(yù)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)。
②方法學(xué)的詳細(xì)說明(例如試劑、設(shè)備、配件、色譜條件、色譜柱、檢測器類型、檢測器信號響應(yīng)靈敏度、系統(tǒng)適用性、樣品制備和其穩(wěn)定性)。
③該確認(rèn)方案需包括的驗(yàn)證指標(biāo)(如專屬性、LOD、LOQ、精密度、準(zhǔn)確度)。如果藥典方法經(jīng)確認(rèn)不適用于指定的產(chǎn)品，則必須開發(fā)和驗(yàn)證替代的方法。微生物方法按照藥典相關(guān)的微生物實(shí)驗(yàn)方法通則完成方法的確認(rèn)。
對于非藥典方法，需進(jìn)行全面的驗(yàn)證。在開始驗(yàn)證之前，應(yīng)結(jié)合方法研發(fā)和優(yōu)化研究的工作，明確方法學(xué)和分析方法的目的。驗(yàn)證方案中要有每個(gè)驗(yàn)證指標(biāo)的方法學(xué)描述，預(yù)定可接受標(biāo)準(zhǔn)并加以論述。應(yīng)采用經(jīng)過確認(rèn)的儀器實(shí)施驗(yàn)證。
3.4 分析方法的生命周期
隨著ICH Q8，Q9，Q10和Q11[1，17－19]在產(chǎn)品工藝方面的應(yīng)用逐漸被廣泛接受，美國藥典論壇在2016年公布了USP新通則1220草案“分析方法的生命周期”[20]，將分析方法分為設(shè)計(jì)開發(fā)(design and development)、確認(rèn)(qualification)和持續(xù)確證(continued verification)3個(gè)階段。首先，要在理解目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況(QTPP)和產(chǎn)品CQA以及過程控制要求的基礎(chǔ)上，確定分析目標(biāo)雜質(zhì)譜(analytical targetprofile，ATP)和關(guān)鍵方法性能(CMAs)，以此為基礎(chǔ)進(jìn)行方法的開發(fā)，確定關(guān)鍵方法參數(shù)(CMPs)并研究設(shè)計(jì)空間。在方法確定后，需進(jìn)行方法確認(rèn)。只有經(jīng)過確認(rèn)的方法才能用于物料和產(chǎn)品的檢驗(yàn)，也才能可靠地用于產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量控制和過程分析等。經(jīng)過確認(rèn)的方法，需持續(xù)確保其在日常使用中能處于受控狀態(tài)，包括方法日常使用時(shí)的持續(xù)性能監(jiān)測和方法變更后的性能確證。
在產(chǎn)品的整個(gè)生命周期，隨著時(shí)間的推進(jìn)，分析方法的驗(yàn)證工作也是越來越全面的。針對Ⅰ期臨床研究IND申報(bào)，F(xiàn)DA一般不要求提交方法驗(yàn)證的數(shù)據(jù)，除了在特定的條件下需要提交與Ⅰ期臨床研究安全性有關(guān)的產(chǎn)品檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證數(shù)據(jù)[21]。進(jìn)入Ⅱ期臨床及Ⅲ期臨床研究，F(xiàn)DA要求[22]，除非使用FDA認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)方法，如USP方法或者《AOACin-ternational book of method》收錄的方法，否則需提交方法驗(yàn)證的資料。
在產(chǎn)品的整個(gè)生命周期，分析方法均存在方法建立、驗(yàn)證、變更或轉(zhuǎn)移等過程。每個(gè)分析方法一旦(包括藥典方法)成功驗(yàn)證(或確認(rèn))和實(shí)施，在產(chǎn)品的生命周期中應(yīng)該嚴(yán)格按照方法操作，以保證方法能持續(xù)適合其既定用途。當(dāng)分析方法發(fā)生變更(實(shí)驗(yàn)參數(shù)、設(shè)備、試劑的變更)以及發(fā)生有可能影響目標(biāo)分析物組成的生產(chǎn)過程的變更時(shí)(如生產(chǎn)工藝變更、制劑配方變更、生產(chǎn)工藝規(guī)模放大等)，需對方法進(jìn)行再驗(yàn)證。再驗(yàn)證的程度取決于變更的性質(zhì)，要保證分析方法維持其關(guān)鍵性能指標(biāo)(如專屬性、精密度、準(zhǔn)確性等)。
04、參比物質(zhì)的建立
藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立過程中，參比物質(zhì)的制備是極其重要的。參比物質(zhì)在產(chǎn)品量值溯源、產(chǎn)品定性、雜質(zhì)控制等藥品質(zhì)量控制中均發(fā)揮重要作用，同時(shí)也是評價(jià)上市產(chǎn)品與臨床試驗(yàn)用樣品質(zhì)量可比性的橋梁。因此，參比物質(zhì)一般采用經(jīng)全面結(jié)構(gòu)確證的代表性工藝批次制備，且推薦上市階段將關(guān)鍵性臨床樣品用于參比物質(zhì)的制備或標(biāo)定，這樣可將放行檢測數(shù)據(jù)與結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)及臨床安全性、有效性數(shù)據(jù)充分銜接和傳遞。例如，在參比物質(zhì)進(jìn)行了全面的一級序列確證的基礎(chǔ)上，如待檢品與參比物質(zhì)放行的肽圖一致則可說明待檢品的一級序列基本正確;同時(shí)，如待檢品的效價(jià)不低于參比物質(zhì)(關(guān)鍵性臨床樣品)，則基本可保證上市產(chǎn)品的有效性。
在研制參比物質(zhì)時(shí)可參考WHO的相關(guān)指南[23－24]。用于產(chǎn)品批檢驗(yàn)的內(nèi)部工作參考品應(yīng)使用一級參考品標(biāo)化。如能獲得國際標(biāo)準(zhǔn)品或國家標(biāo)準(zhǔn)品，則應(yīng)盡可能用其作為參考物質(zhì)。進(jìn)行生物學(xué)測定和物理化學(xué)檢測用一種參比物質(zhì)是比較理想的，但有時(shí)也需要用各自的參比物質(zhì)。另外，產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)及工藝相關(guān)雜質(zhì)有時(shí)亦需分別建立參比物質(zhì)[1]。在進(jìn)行參比物質(zhì)更換時(shí)，應(yīng)充分進(jìn)行不同代次參比物質(zhì)相關(guān)性的分析及新的參比物質(zhì)的標(biāo)定，保證參比物質(zhì)及參比物質(zhì)賦值的可溯源性。
05、小結(jié)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定是生物制品研發(fā)中的一項(xiàng)主要內(nèi)容，是產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的重要前提。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立貫穿于產(chǎn)品研發(fā)的整個(gè)過程，凝聚了工藝控制及驗(yàn)證、產(chǎn)品質(zhì)量分析、穩(wěn)定性研究、臨床前/臨床研究結(jié)果，通過適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析并建立關(guān)聯(lián)性。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立具有一定的階段性，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品上市后檢測數(shù)據(jù)的積累逐步提高和不斷完善。
來源：藥審中心
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